[發(fā)明專利]一株青霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)果膠酶制劑的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110442999.5
• 申請(qǐng)日: 2021-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN113502282A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡志強(qiáng);邢新榮;胡衛(wèi)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇悠恒生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/88
• 分類號(hào): C12N9/88;C12N1/14;C12R1/80
• 代理公司: 南京天翼專利代理有限責(zé)任公司 32112
• 代理人: 崔立青;王玉梅

本發(fā)明公開了一株青霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)果膠酶制劑的方法，該方法通過高通量篩選，篩選出一株果膠酶高產(chǎn)菌株P(guān)enicilliumsp.Y，并對(duì)其固態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化，最終生產(chǎn)出的果膠酶制劑活性高達(dá)13800U/g；該一株青霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)果膠酶制劑的方法，采用甲基磺酸乙酯(EMS)誘變菌株，在致死率為85.8％的條件下成功篩選出一株酶活高達(dá)19000U/g的產(chǎn)酶菌株，并通過后續(xù)優(yōu)化試驗(yàn)確定菌株最適的培養(yǎng)基組分以及生長(zhǎng)條件：豆粕20g，初始含水量68％，葡萄糖含量3％，蛋白胨含量1％，CaCl2 0.04％，F(xiàn)eCl3 0.04％，接種量4％，培養(yǎng)溫度38℃，培養(yǎng)5天后酶活高達(dá)2200U/g，大大提高了菌株產(chǎn)酶能力，達(dá)到理想目標(biāo)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物發(fā)酵工程領(lǐng)域，具體為一株青霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)果膠酶制劑的方法。

背景技術(shù)

酶制劑在飼料行業(yè)中對(duì)動(dòng)物的消化吸收以及抗?fàn)I養(yǎng)因子的消除等方面起到至關(guān)重要的作用。其中復(fù)合酶制劑又是一種可實(shí)現(xiàn)多酶催化功效的產(chǎn)品，應(yīng)用領(lǐng)域更廣泛(化學(xué)品、養(yǎng)殖業(yè)、食品以及環(huán)境保護(hù)等方面)，在降低飼料業(yè)生產(chǎn)成本的同時(shí)，對(duì)環(huán)境保護(hù)也起著一定的作用。并且隨著21世紀(jì)生物技術(shù)在國(guó)內(nèi)外酶制劑市場(chǎng)的迅猛發(fā)展，人們會(huì)越來越重視酶制劑的性能以及在市場(chǎng)中的應(yīng)用價(jià)值。

果膠酶，作為世界四大酶制劑之一，可以催化水解等反應(yīng)，在果汁澄清、榨汁、釀酒、榨油等食品行業(yè)應(yīng)用十分廣泛，此外，果膠酶還在紡織、醫(yī)藥、造紙、環(huán)境、生物技術(shù)、飼料等領(lǐng)域有所發(fā)展，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和飼料等行業(yè)領(lǐng)域。食品工業(yè)用果膠酶多源于微生物，近年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)果膠酶的研究已經(jīng)進(jìn)入了分子生物學(xué)水平，已從許多種屬微生物中克隆了果膠酶基因和測(cè)序，并對(duì)果膠酶基因的結(jié)構(gòu)、功能、調(diào)控及其表達(dá)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)與性能等方面進(jìn)行了探索。我國(guó)對(duì)果膠酶的需求量很大，但國(guó)內(nèi)果膠酶的發(fā)展卻較緩慢，且通常是將果膠酶單一使用，這限制了果膠酶的應(yīng)用范圍及效果。

在微生物發(fā)酵工業(yè)中，菌種是直接決定產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量是否達(dá)標(biāo)的關(guān)鍵性因素，一般從自然界分離到的菌株積累產(chǎn)物能力非常低，無法實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)要求。本發(fā)明從常州市南郊的麥田中采集土樣，歷時(shí)6年，進(jìn)行微生物的篩選、培養(yǎng)、鑒定、發(fā)酵條件初步優(yōu)化，最終獲得果膠酶高產(chǎn)菌株P(guān)enicillium sp.Y。

為此，我們提出一株青霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)果膠酶制劑的方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)背景技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一株青霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)果膠酶制劑的方法，解決了上述背景技術(shù)提出的問題。

本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一株青霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)果膠酶制劑的方法，該方法通過高通量篩選，篩選出一株果膠酶高產(chǎn)菌株P(guān)enicilliumsp.Y，并對(duì)其固態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化，最終生產(chǎn)出的果膠酶制劑活性高達(dá)13800U/g。

優(yōu)選的，所述青霉菌(Penicilliumsp.)Y為一種高產(chǎn)果膠酶的微生物，于2015年1月28日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCCNO.10455。

一株青霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)果膠酶制劑的方法，該方法包括以下步驟：

步驟一、所獲得菌株篩選自郊區(qū)農(nóng)田土壤，經(jīng)過高通量篩選，再經(jīng)篩選培養(yǎng)基分離純化，得到21株形態(tài)各異的產(chǎn)酶菌株；

步驟二、通過96孔板快速初篩，得到10株高產(chǎn)酶微生物菌株，再經(jīng)過搖瓶復(fù)篩，得到1株高產(chǎn)果膠酶微生物菌株Y。

優(yōu)選的，所述菌株Y的菌落在初篩培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)初期菌絲為絨狀，呈白色，后期變成淡綠色，菌落由束狀的與單生的分生孢子梗相間組成同心圈，背面無色，菌絲體隨培養(yǎng)時(shí)間的增加顏色逐漸加深，最后變成深灰色顆粒狀。

優(yōu)選的，所述菌株Y分生孢子梗壁光滑，帚狀枝具有單束的小梗，分枝1-2次，密集，菌絲有橫隔，孢子成束狀或鏈狀，鏈長(zhǎng)而糾結(jié)，單個(gè)孢子為球形，腎形，孢子表面粗糙，長(zhǎng)徑為3-3.5μm，依據(jù)真菌鑒定手冊(cè)，初步鑒定該菌為半知菌類，叢梗孢目，叢梗孢科，青霉屬。