[發(fā)明專利]一種花椒葉黃酮和多糖同步提取方法

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• 申請日: 2021-04-23
• 公開（公告）號: CN112898262A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設計）人: 劉韞滔;段松岐;李林鍵;孫慶杰;邱立忠;卞希良;鄔應龍;劉愛平;李誠
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C07D311/30
• 分類號: C07D311/30;C07D311/40;C08B37/00
• 代理公司: 蘇州拓云知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 32344
• 代理人: 張宏闖

本發(fā)明公開一種花椒葉黃酮和多糖同步提取工藝，采用黑曲霉和枯草芽孢桿菌混合發(fā)酵花椒葉，通過黑曲霉和枯草芽孢桿菌生長代謝產(chǎn)生的纖維素酶，破壞花椒葉的細胞壁，促進黃酮和多糖的溶出，提高了提取率；采用微生物發(fā)酵技術(shù)與超聲波提取結(jié)合的新型提取方法，從花椒葉中同步獲得黃酮和多糖，減少了時間和能源的消耗，節(jié)約了成本。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及植物有效成分提取技術(shù)領域，具體是一種花椒葉黃酮和多糖同步提取方法。

背景技術(shù)

目前，花椒葉中黃酮、多糖主要采用熱水浸提法、超聲波法、超臨界萃取法和微波提取法等進行提取，但是提取率較低，且多集中在對單一成分的提取，資源利用率較低，成本較高，微生物發(fā)酵技術(shù)主要是利用微生物在生長代謝過程中分泌的各種生物酶類，破壞植物細胞的結(jié)構(gòu)，使活性成分能夠較大程度溶出，提高提取效率，里氏木霉、黑曲霉、放線菌和枯草芽孢桿菌等均可產(chǎn)纖維素酶、蛋白酶等酶類，能夠破壞植物細胞壁，使營養(yǎng)物質(zhì)大量溶出。

本發(fā)明通過黑曲霉和枯草芽孢桿菌混合發(fā)酵技術(shù)結(jié)合超聲波提取技術(shù)從花椒葉中同步提取黃酮和多糖，并采用正交試驗優(yōu)化發(fā)酵提取條件，以實現(xiàn)花椒葉中黃酮和多糖最大程度的提取。

發(fā)明內(nèi)容

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種花椒葉黃酮和多糖同步提取方法，其特征在于，包括以下工藝步驟：

①花椒葉預處理

將花椒葉于55-65℃恒溫干燥箱中烘干，粉碎后過60目篩，制得花椒葉粉；

②發(fā)酵培養(yǎng)基的制備

稱取適量的花椒葉粉，按照料液比加入超純水，混勻后于110-130℃滅菌15-25min，冷卻至室溫后，按照相應的接種量和菌種比例接入經(jīng)活化后的枯草芽孢桿菌和黑曲霉混合種子液，置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，進行發(fā)酵培養(yǎng)，設置相應的溫度和轉(zhuǎn)速，進行發(fā)酵培養(yǎng)；

③黃酮的提取

發(fā)酵結(jié)束后，加入60％乙醇，置于超聲波清洗機中，在超聲功率100W、超聲頻率40kHz條件下提取30min，溫度為60℃，過濾；

④多糖的提取

取步驟③的濾渣，加入4倍體積的超純水，置于超聲波清洗機中，在超聲功率100W、超聲頻率40kHz條件下提取30min，溫度為60℃，過濾濃縮。

進一步地，作為優(yōu)選，所述料液比為1:20(g:mL)。

進一步地，作為優(yōu)選，所述接種量為5％。

進一步地，作為優(yōu)選，所述黑曲霉和枯草芽孢桿菌混合種子液菌種比例為1:2。

進一步地，作為優(yōu)選，所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度為31℃、轉(zhuǎn)速為150r/min，發(fā)酵時間為3d。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

(1)首次采用黑曲霉和枯草芽孢桿菌混合發(fā)酵花椒葉，通過黑曲霉和枯草芽孢桿菌生長代謝產(chǎn)生的纖維素酶，破壞花椒葉的細胞壁，促進黃酮和多糖的溶出，提高了提取率；

(2)采用微生物發(fā)酵技術(shù)與超聲波提取結(jié)合的新型提取方法，從花椒葉中同步獲得黃酮和多糖，減少了時間和能源的消耗，節(jié)約了成本。

附圖說明

圖1為料液比對花椒葉黃酮和多糖含量的影響；

圖2為接種量對花椒葉黃酮和多糖含量的影響；

圖3為菌種比例對花椒葉黃酮和多糖含量的影響；

圖4為發(fā)酵溫度對花椒葉黃酮和多糖含量的影響；

圖5為發(fā)酵時間對花椒葉黃酮和多糖含量的影響

具體實施方式