[發明專利]一種人間充質干細胞上清干粉凝膠的制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110441053.7
• 申請日: 2021-04-23
• 公開（公告）號: CN113304103A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 華進聯;艾力·艾爾肯
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A61K9/06
• 分類號: A61K9/06;A61K35/28;A61K47/10;A61K47/22;A61K47/32;A61P17/02;C12N5/0775
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 鐘斌

本發明公開了一種人間充質干細胞上清干粉凝膠的制備方法和應用。本發明用含有無血清的間充質干細胞完全培養液培養傳代人源臍帶間充質干細胞，收集低傳代的3?5代間充質干細胞上清液制備成凍干粉。本發明人源臍帶間充質干細胞培養上清液凍干粉的制備方法，所制備的凍干粉有效的保存了人源臍帶間充質干細胞上清液中的各種具有生物活性的細胞因子混合物，可以有效地解決上清液保存期有限，為人間充質干細胞培養液的臨床及產業化應用建立奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于干細胞技術領域，涉及一種人間充質干細胞上清干粉凝膠的制備方法和應用。

背景技術

皮膚是人體最大的內分泌、免疫器官，是構成機體抵御外界不良因素侵害的第一道屏障，由于直接與外界環境接觸，極易遭受多種物理、化學、病原微生物或手術等因素的損傷。皮膚創傷的發病率高，修復過程復雜，易造成愈合不良等問題，產生巨大的經濟、社會負擔，嚴重影響患者的生活質量。臨床上對皮膚外傷常規采用清創、抗炎等治療手段以抗感染促進創面愈合，而且常使用抗生素輔助抗炎來自然愈合，容易帶來抗生素濫用造成的各種嚴重不良后果，最終延緩愈合或始終難以愈合。因此如何采取有效措施促進創傷修復、減少疤痕形成也一直是臨床皮膚外科的巨大挑戰之一。傷口愈合是一個動態交互的過程，涉及到細胞與細胞間、細胞與基質或細胞因子間的復雜的相互作用，容易產生傷口延遲愈合或過度愈合形成瘢痕疙瘩等問題。目前臨床促進皮膚創傷愈合尚無特效治療方案。

間充質干細胞(Mesenchymal stem cells，MSC)是干細胞家族的重要成員，間充質千細胞可被定義成一種具有多分化潛能的成體干細胞，在體外培養時是一類進行貼壁增殖的一群異質性細胞群，其具有梭狀的形態學特征，可通過擴展形成集落，在特異的條件培養基中可定向分化為硬骨、軟骨、脂肪、肌肉、肌腱、韌帶、神經、肝肌、內皮等多種組織細胞類型。

研究表明間充質干細胞具有強大的旁分泌作用，間充質干細胞上清液中含有多種有效的生長因子。目前已證實的幾種重要的生長因子包括：血管內皮生長因子、堿性纖維母細胞生長因子、血管生成素、轉化生長因子、血小板源性生長因子、粒細胞巨噬細胞刺激因子。然而，正是由于間充質干細胞上清液中復雜的成分，且各種生長因子具有不同的生物學活性及作用。

傳統間充質干細胞移植治療，一般都是直接靜脈注射間充質干細胞。而這種注射會誘導免疫排斥反應和歸巢率低。而且隨著時間的延長，細胞不斷出現凋亡，活力和效力都出現了下降，這限制了其臨床應用。但細胞培養上清液含有各種具有生物活性的細胞因子，它的應用可以避免干細胞移植治療時的免疫排斥反應和有效性。細胞上清液是細胞培養的營養液，細胞增殖過程中的營養吸收和因子的分泌都是在上清液中進行交換和完成的。液態的間充質干細胞培養上清液在室溫保存時間短，這就阻礙了它的推廣和應用。

發明內容

本發明解決的問題在于提供一種人間充質干細胞上清干粉凝膠的制備方法和應用，為進一步開發人源臍帶間充質干細胞的應用，延長有效保存時間，提高傷口愈合的速度、質量和提供了奠定基礎。

本發明是采用如下技術方案來實現：

一種人間充質干細胞上清干粉凝膠的制備方法，包括以下操作：

1)用α-MEM完全培養液培養傳代培養分離的人臍帶間充質干細胞；

2)當細胞生長密度到80～90％度時，收集低傳代人間充質干細胞培養上清液；將收集的上清液無菌離心，棄沉淀取上清，上清液-80℃凍存備用；

3)凍干粉的制備：將-80℃凍存的凝固體通過冷凍干燥機，于真空壓力0.02～0.030mbar、-88℃下蒸發水分48～50h，獲取干細胞上清凍干粉；