[發(fā)明專利]用于分散生物組織的酶試劑盒和使用其獲得單細(xì)胞懸液的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110436874.1 | 申請(qǐng)日： | 2021-04-22 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113388599B | 公開（公告）日： | 2022-10-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李相堯;吳橙;劉麗;盛濤;王菁華;連艷娜 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 浙江大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N9/50 | 分類號(hào)： | C12N9/50;C12N9/52;C12N9/22;C12N5/079 |
| 代理公司： | 上海上谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31342 | 代理人： | 蔡繼清 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 分散 生物 組織 試劑盒 使用 獲得 單細(xì)胞 方法 | ||
本申請(qǐng)公開了一種用于分散生物組織的酶試劑盒和使用其獲得單細(xì)胞懸液的方法。本申請(qǐng)中，所述酶試劑盒包括：第一試劑和第二試劑，所述第一試劑包括鏈霉蛋白酶，所述第二試劑中包括木瓜蛋白酶。本申請(qǐng)所述的用于分散生物組織的酶試劑盒成分簡(jiǎn)單，制備方便，可應(yīng)用于多種組織的消化，使用該方法獲得的單細(xì)胞懸液成活率高、成團(tuán)率低，有利于后續(xù)進(jìn)行分選和單細(xì)胞測(cè)序。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明實(shí)施例涉及細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，特別涉及用于分散生物組織的酶試劑盒和使用其獲得單細(xì)胞懸液的方法。
背景技術(shù)
單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)在單細(xì)胞水平觀測(cè)基因的變化，更好地對(duì)組織進(jìn)行細(xì)胞分類，尋找特定細(xì)胞類型中基因表達(dá)的變化，該技術(shù)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的研究。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的關(guān)鍵，在于獲得高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液。獲得單細(xì)胞懸液過(guò)程十分復(fù)雜，這是由于不同的組織中，參與細(xì)胞粘合與細(xì)胞連接的成分不盡相同，即使是同一組織，使用不同的制備方法獲得的單細(xì)胞在表面性質(zhì)、激素反應(yīng)狀態(tài)以及物質(zhì)能量代謝都可能相差很大。因此，開發(fā)合適的制備方法以獲得高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液至關(guān)重要。
現(xiàn)有技術(shù)中，常使用酶消化法制備單細(xì)胞懸液。酶消化法主要使用鏈霉蛋白酶(Pronase)作為水解細(xì)胞間緊密連接的蛋白質(zhì)，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞游離，但該方法制備的單細(xì)胞懸液細(xì)胞碎片較多，細(xì)胞成團(tuán)率高，且細(xì)胞活率相對(duì)較差，尤其是在腦組織細(xì)胞分離的時(shí)，由于神經(jīng)細(xì)胞和大腦中其他類型細(xì)胞連接復(fù)雜，傳統(tǒng)的鏈霉蛋白酶(Pronase)無(wú)法將在保證高成活率、低成團(tuán)率的基礎(chǔ)上將復(fù)雜的腦組織細(xì)胞分散，常常得到碎片很多的單細(xì)胞懸液，不利于后續(xù)進(jìn)行分選和單細(xì)胞測(cè)序。鑒于此，開發(fā)一種用于分散生物組織的酶試劑盒和開發(fā)一種高質(zhì)量分離組織細(xì)胞獲得高成活率、低成團(tuán)率的單細(xì)胞懸液的方法尤為重要。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施方式的目的在于提供一種用于分散生物組織的酶試劑盒和使用其獲得單細(xì)胞懸液的方法，使得使用該方法獲得的單細(xì)胞懸液成活率高、成團(tuán)率低，有利于后續(xù)進(jìn)行分選和單細(xì)胞測(cè)序。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的實(shí)施方式提供了一種用于分散生物組織的酶試劑，所述酶試劑盒包括：第一試劑和第二試劑，所述第一試劑包括鏈霉蛋白酶，所述第二試劑中包括木瓜蛋白酶。
在一些優(yōu)選的方案中，所述生物組織優(yōu)選為哺乳動(dòng)物腦組織或哺乳動(dòng)物耳蝸前庭組織。
基于進(jìn)一步降低細(xì)胞間的粘結(jié)性、促進(jìn)生物組織消化的有益效果出發(fā)，在一些優(yōu)選的方案中，所述第一試劑還包括DNA酶和/或牛血清蛋白(BSA)；所述DNA酶優(yōu)選為DNaseI。
基于進(jìn)一步降低細(xì)胞間的粘結(jié)性、促進(jìn)生物組織消化的有益效果出發(fā)，在一些優(yōu)選的方案中，所述第二試劑還包括DNA酶和/或牛血清蛋白(BSA)；所述DNA酶優(yōu)選為DNaseI。
在一些優(yōu)選的方案中，所述第一試劑還包括HAG培養(yǎng)基。
在一些優(yōu)選的方案中，所述第二試劑還包括HAG培養(yǎng)基。
在一些優(yōu)選的方案中，所述第一試劑由HAG培養(yǎng)基、DNA酶、10％牛血清蛋白和鏈霉蛋白酶組成；所述第二試劑由HAG培養(yǎng)基、DNA酶、10％牛血清蛋白和木瓜蛋白酶組成。
在一些優(yōu)選的方案中，每毫升所述第一試劑中，包括：
DNA酶 (0.5～1.4)V/V％(0.9)，
10％牛血清蛋白 (5.0～14.0)V/V％(9)，
鏈霉蛋白酶 (0.5～5.0)mg/mL。
在一些優(yōu)選的方案中，所述第一試劑由HAG培養(yǎng)基、DNA酶、10％牛血清蛋白和鏈霉蛋白酶組成。
在一些優(yōu)選的方案中，每毫升所述第二試劑中包括：
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