[發明專利]KRAS基因突變的檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202110432225.4
• 申請日: 2021-04-21
• 公開（公告）號: CN113005183A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 吳亞;邱宇;鄧魏鑫;王維旭;張喆
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友醫療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 易賢衛

1.一種KRAS基因突變的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒中包括：突變位點的特異性上游引物、下游引物和雙淬滅探針；

其中所述的特異性上游引物的從5’端到3’端依次為：捕獲區：長度為12-21bp，與目的片段完全配對；錯配識別區：長度為3-6bp，與目的片段錯配；突變保護區：包含突變識別位點，以及與所述突變識別位點配對形成發卡結構的3’端；

所述下游引物與KRAS基因突變位點的下游配對；

所述雙淬滅探針上帶有兩個淬滅基團。

2.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述突變位點的特異性上游引物包括：

①Gly12Cys突變位點的特異性上游引物：其序列如SEQ ID NO.1所示；

②Gly12Ser突變位點的特異性上游引物：其序列如SEQ ID NO.2所示；

③Gly12Arg突變位點的特異性上游引物：其序列如SEQ ID NO.3所示；

④Gly12Val突變位點的特異性上游引物：其序列如SEQ ID NO.4所示；

⑤Gly12Asp突變位點的特異性上游引物：其序列如SEQ ID NO.5所示；

⑥Gly12Ala突變位點的特異性上游引物：其序列如SEQ ID NO.6所示；

⑦Gly13Asp突變位點的特異性上游引物：其序列如SEQ ID NO.7所示。

3.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述下游引物為通用下游引物，其序列如SEQ ID NO.8所示。

4.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述雙淬滅探針序列的5’端標記有熒光報告基團，3端標記有連接了MGB修飾基團的熒光淬滅基團。

5.根據權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光報告基團選自FAM、VIC、ROX、Cy3、Cy5、HEX、JOE中的任意一種；

所述熒光淬滅基團選自TAMRA、BHQ1、BHQ2、NFQ、LFN中的任意一種。

6.根據權利要求3所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述雙淬滅探針的序列為：5’FAM-CAAGAGTGC-LFN-CTTGACGATA-MGB 3’。

7.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒中還包括：DNA聚合酶、UNG酶、dNTPs和Mg²⁺。

8.根據權利要求7所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒中的PCR反應體系為每25μL含：DNA聚合酶0.5U～1.0U，UNG酶0.1U-0.5U，MgCl₂ 1-5mM，dNTPs 0.1-0.4mM，上游引物0.1μM-0.5μM，下游引物0.1μM-0.5μM，雙淬滅探針0.1μM-0.2μM。

9.根據權利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒中還包括：陽性對照液和/或空白對照液。

10.如權利要求1-9任一項所述的檢測試劑盒在檢測KRAS基因突變的非疾病診斷和治療目的上的用途。