[發明專利]用于檢測糯玉米waxy基因的功能性分子標記及應用

在審

• 申請號: 202110407150.4
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN112921115A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 陳甲法;吳建宇;李歡;周波
• 申請（專利權）人: 河南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 西安合創非凡知識產權代理事務所(普通合伙) 61248
• 代理人: 馬英

1.用于檢測糯玉米waxy基因的功能性分子標記，其特征在于：所述功能性分子標記所采用的引物序列為：

FMwx1F: CACGGCATCTACAGGGACG；

FMwx1R: GATGTTGTGGATGCAGAAAGC。

2.如權利要求1所述的用于檢測糯玉米waxy基因的功能性分子標記的應用，其特征在于：可用于鑒定糯玉米自交系。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于：采用PCR加電泳的方法來檢測差異，包括如下步驟：

S1、利用FMwx1F和FMwx1R進行PCR擴增

配置PCR反應體系：2×Taq PCR Mix 15μL；ddH2O 13μL；FMwx1F 0.5μL；FMwx1R 0.5μL；DNA模板1μL；

配置完成后，在?PCR?儀上進行如下的反應程序：預變性95℃5min，使模板充分變性，然后進入PCR擴增循環，每個循環先95℃變性30s，58℃復性30s，72℃延伸1min；循環?35次后，4℃保存，完成PCR的擴增；

S2、利瓊脂糖凝膠電泳進行PCR產物的檢測；

將PCR擴增后的產物用3%濃度的瓊脂糖凝膠分離檢測，依次吸取PCR擴增后的產物6μl與1μl 的6×loading buffer溶液混勻后，依次加到點樣孔中；在第一個點樣孔中加入DNAMarker作為分子量標記，用于檢測目的條帶的大??；用1×TAE電泳緩沖液進行電泳，設置電壓220V，電流150mA，時間45min；電泳結束后，用核酸染料進行染色并在凝膠成像分析系統下檢測PCR反應結果并保存膠圖。