[發明專利]一種卵透明帶結合試驗中的精子計數方法

在審

• 申請號: 202110403651.5
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113106141A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 廉穎;劉平;喬杰;王瑩;胡靜;李卓;任秀蓮;李悅;王亞朋;王中偉
• 申請（專利權）人: 北京大學第三醫院（北京大學第三臨床醫學院）
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 張可

1.一種卵透明帶結合試驗中的精子計數方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)精子準備；

(2) 卵子準備；

(3) 配子共培養：

a.用胚胎轉移管吸取所需數量的卵母細胞，將其轉移至已調好精子受精密度的受精培養液中；

b.在CO₂培養箱內孵育3小時；

c.從受精培養液中回收卵母細胞；

d.用胚胎轉移管在G-MOPS PLUS培養液中沖洗掉疏松附著在卵母細胞上的精子；

(4) 卵母細胞的分析

a.準備載玻片，將3-5μL伊紅染料滴于載玻片上，制備伊紅染料微滴；

b.將卵母細胞放入伊紅染料微滴；

c.覆蓋蓋玻片；

d.在放大倍數為×10-80的體視顯微鏡下觀察伊紅染料蓋片，找到壓扁的卵母細胞，在載玻片底面劃“圈”，圈出卵的大概位置；

e.在放大倍數為×40的倒置顯微鏡下觀察壓片，尋找標記的圓圈并找到卵母細胞，移動載物臺，將卵母細胞移至視野中央，轉換至放大倍數為×200的高倍鏡下觀察；

f.計數透明帶上的精子。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）包括：a.充分混勻精液標本；b.用密度梯度離心法或上游法分離精子；c.用巴斯德吸管輕柔地吹吸并混勻精子，測定精子的密度、活力；d.用受精培養液稀釋精子至受精密度。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述受精培養液為vitrolife的洗精受精液。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述受精密度為約0.2×10⁶個精子/ml。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中的卵母細胞在使用前儲存在37℃，6% CO2培養箱中備用。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中配子在37℃、含6v/v% CO₂的環境中孵育。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中所述胚胎轉移管直徑≥200μm。