[發明專利]一種同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法

在審

• 申請號: 202110403207.3
• 申請日: 2021-04-14
• 公開（公告）號: CN114152706A
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 樊靜靜;陳武煉;強維;王培娟
• 申請（專利權）人: 上海義準生物有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 上海科律專利代理事務所(特殊普通合伙) 31290
• 代理人: 金碎平

1.一種同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，獲取包括乳清酸的代謝物作為樣品，其特征在于，包括如下步驟：

S1、使用提取液從所述樣品中提取所述代謝物；

S2、提供包含已知量的一種或多種穩定同位素標記的內標溶液，所述內標溶液對應于樣品中待檢測的代謝物；

S3、使所述代謝物和所述內標溶液離子化以產生離子；

S4、多反應監測模式下在質譜圖中獲得一種或多種離子的質荷比；以及

S5、在多反應監測模式下確定乳清酸的信號強度；

S6、使用對應于以上代謝物的穩定同位素標記的內標溶液，檢測和定量乳清酸的量。

2.如權利要求1所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述代謝物包含氨基酸、游離和酰基肉堿、溶血卵磷脂酰膽堿、琥珀酰丙酮和極長碳鏈的酰基肉堿中的一種或多種。

3.如權利要求2所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、亮氨酸/異亮氨酸/羥基脯氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸和/或纈氨酸；

所述游離和酰基肉堿包括游離肉堿、乙酰肉堿、丙酰肉堿、丙二酰肉堿/3-羥基-異戊酰肉堿、異戊酰肉堿、異戊烯酰肉堿、戊二酰肉堿/3-羥基-己酰肉堿、己酰肉堿、己二酰肉堿、辛酰肉堿、辛烯酰肉堿、癸酰肉堿、癸烯酰肉堿、癸二烯酰肉堿、十二碳酰肉堿、十二碳烯酰肉堿、十四碳酰肉堿、十四碳烯酰肉堿、十四碳二烯酰肉堿、3-羥基-十四碳酰肉堿、十六碳酰肉堿、十六碳烯酰肉堿、3-羥基-十六碳酰肉堿、3-羥基-十六碳烯酰肉堿、十八碳酰肉堿、十八碳烯酰肉堿、十八碳二烯酰肉堿、3-羥基-十八碳酰肉堿和/或3-羥基-十八碳烯酰肉堿；

所述極長碳鏈的酰基肉堿包括C20-脂酰肉堿、C22-脂酰肉堿、C24-脂酰肉堿和/或C26-脂酰肉堿；

所述溶血卵磷脂酰膽堿包括C20-LPC、C22-LPC、C24-LPC和/或C26-LPC。

4.如權利要求1所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述提取液由甲醇、水和羧酸組成，所述甲醇的體積含量為50％-100％，羧酸濃度為0.05-1mol/L，溶劑為水，所述羧酸選自甲酸、乙酸和草酸中的一種或其組合。

5.如權利要求1所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述樣品為體液樣品或血液樣品。

6.如權利要求5所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述樣品為干燥的血液樣品。

7.如權利要求1所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述步驟S3通過將提取的代謝物和內標溶液制成的標準品通過液相系統輸送至質譜儀的離子源進行離子化，所述步驟S4使用三重四極桿質譜儀或高分辨率質譜儀獲取一種或多種離子的質荷比，所述步驟S5通過選擇至少一種精確的質荷比離子確定乳清酸的信號強度。

8.如權利要求7所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述液相系統所用的流動相溶液由乙腈、水和飽和一元羧酸組成，所述乙腈的體積含量為50％-100％，所述飽和一元羧酸濃度為0.05-1mol/L，溶劑為水，所述飽和一元羧酸為甲酸、乙酸、丙酸或丁酸。

9.如權利要求1所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述內標溶液為對應于以下一種或多種穩定同位素標記的內標準品：丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、纈氨酸、游離肉堿、乙酰肉堿、丙酰肉堿、丙二酰肉堿、異戊酰肉堿、戊二酰肉堿、己酰肉堿、辛酰肉堿、癸酰肉堿、癸烯酰肉堿、十二碳酰肉堿、十四碳酰肉堿、十六碳酰肉堿、十八碳酰肉堿、C26-脂酰肉堿、C26-LPC、乳清酸和琥珀酰丙酮衍生物3-(5甲基-1H-吡唑-3yl)丙酸。

10.如權利要求1所述的同時檢測干血片中多種新生兒篩查代謝物的方法，其特征在于，所述內標溶液為對應于以下一種或多種穩定同位素標記的內標準品：²H₄-丙氨酸，²H₄,¹³C-精氨酸、²H₂-瓜氨酸、¹⁴N,2-¹³C-甘氨酸、²H₃-亮氨酸、²H₃-蛋氨酸、²H₆-鳥氨酸、¹³C₆-苯丙氨酸、¹³C₅-脯氨酸、¹³C₆-酪氨酸、²H₄-纈氨酸、²H₉-游離肉堿、²H₃-乙酰肉堿、²H₃-丙酰肉堿、²H₆-戊二酰肉堿、²H₃-丁酰肉堿、²H₉-異戊酰肉堿、²H₃-己酰肉堿、²H₃-辛酰肉堿、²H₃-癸酰肉堿、²H₃-十二碳酰肉堿、²H₃-十四碳酰肉堿、²H₃-十六碳酰肉堿、²H₃-十八碳酰肉堿、²H₃-二十六碳酰肉堿、²H₄-C26:0-LPC、¹⁵N₂-乳清酸和¹³C₅-MPP³。