[發明專利]一種介導肺腺癌細胞焦亡的非編碼長鏈RNA基因

在審

• 申請號: 202110394689.0
• 申請日: 2021-04-13
• 公開（公告）號: CN112961857A
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 蔣日磊;許家佗;劉平;李倩;陳筱雷
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 北京高航知識產權代理有限公司 11530
• 代理人: 李浩

本發明屬于生物技術領域，涉及一種未見報道的新發現非編碼長鏈RNA基因TCONS?14036介導肺腺癌NCI?H1299細胞焦亡的機理及其實施方法。本發明首次公開了TCONS?14036基因的序列，并根據此序列構建TCONS?14036過表達質粒，填補了新發現非編碼長鏈RNA基因TCONS?14036在肺癌治療領域的空白，明確其轉染NCI?H1299細胞后具有介導細胞焦亡的能力；明確了TCONS?14036對肺腺癌NCI?H1299細胞焦亡的作用機理，為推動TCONS?14036進入抗肺腺癌臨床應用提供依據。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種未見報道的新發現非編碼長鏈RNA基因TCONS-14036介導肺腺癌NCI-H1299細胞焦亡的機理及實施方法。

背景技術

細胞焦亡是一種伴隨炎癥反應，并參與機體免疫應答的細胞程序性死亡方式。2005年，Susan L. Fink等人首次提出細胞焦亡的定義，并指出，由于炎癥反應伴隨，細胞焦亡形態學上同時具有細胞壞死和凋亡的特征。細胞焦亡與腫瘤相關既往研究中，NLRP3、AIM2等炎性小體誘發腫瘤焦亡抑制效應已被證實，P53等典型抑癌基因誘導細胞焦亡抑制腫瘤生長已被報道。近期，Zhang Z等人對GSDME蛋白通過激活細胞焦亡增強抗腫瘤免疫，達到腫瘤抑制作用的報道，則將研究氛圍推向高潮。

長鏈非編碼RNA是一類具有多種大量未明確生物學功能的轉錄本。已知的調控方式中，lncRNA通過染色質重塑、轉錄及轉錄后調控，行使對下游DNA、RNA和蛋白質的調節功能。

肺癌是目前世界范圍內發病率和死亡率增長最快，對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。由于肺癌高度惡性的生物行為學表現，新療法的開發與應用迫在眉睫。在既有研究中，lncRNA致癌與抑癌功能已被證實，但是，利用新發現非編碼長鏈RNA基因用于肺癌治療依然是空白。

發明內容

為了解決現有技術存在的問題，本發明的目的是填補新發現非編碼長鏈RNA基因TCONS-14036在肺癌治療領域的空白，明確TCONS-14036對肺腺癌NCI-H1299細胞焦亡的作用機理，提供理論依據推動TCONS-14036進入抗肺腺癌臨床應用。

為了達到上述技術目的，本發明提供的技術方案如下：一種介導肺腺癌細胞焦亡的非編碼長鏈RNA基因TCONS-14036，具體基因序列如SEQ ID NO：1所示。

所提供非編碼長鏈RNA基因TCONS-14036過表達質粒通過PGMLV-6395載體構建。TCONS-14036 過表達質粒的過表達效率在938-6525倍。

進一步的，所述TCONS-14036過表達質粒轉染NCI-H1299細胞后，誘導NCI-H1299細胞死亡。

進一步的，所述TCONS-14036過表達質粒轉染NCI-H1299細胞后，誘導NCI-H1299細胞炎癥因子IL-1β和IL-18釋放。

進一步的，所述TCONS-14036過表達質粒轉染NCI-H1299細胞后，誘導NCI-H1299細胞ASC蛋白寡聚化，并形成ASC瘢痕。

進一步的，所述TCONS-14036過表達質粒轉染NCI-H1299細胞后，促進NCI-H1299細胞caspase1、IL-1β和GSDMD蛋白剪切。

進一步的，所述TCONS-14036過表達質粒轉染NCI-H1299細胞后，誘導NCI-H1299細胞中NLRP3炎癥小體釋放至胞漿。

進一步的，運用RT-qPCR檢測TCONS-14036表達水平的特異性擴增引物序列為：

TCONS-14036-F: 5’-CCGTGGACCCCGCCCTTC-3’；

TCONS-14036-R: 5’-CCTCACCTCAGCCATTGAACTCAC-3’。