[發明專利]一種負壓平衡離心制片方法

有效

• 申請號: 202110384046.8
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113109124B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 朱思龍
• 申請（專利權）人: 興宏業（武漢）科技有限公司
• 主分類號: G01N1/38
• 分類號: G01N1/38;G01N1/28
• 代理公司: 武漢瀛卓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42255
• 代理人: 朱詩恩;張靜

1.一種負壓平衡離心制片方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，制作涂覆有粘附劑的載玻片，并安裝于玻片架上；

S2，將制片倉安裝在玻片架上并壓緊載玻片，將裝有處理液、細胞標本液的混合液的離心瓶安裝在制片倉的另一端上形成離心套件，并使制片倉內腔與大氣保持通暢，其中離心瓶的一端具有細小開口其余部分密封，所述離心瓶包括離心瓶本體，所述離心瓶本體與所述細小開口之間通過細管相連，所述細小開口朝向載玻片并與載玻片之間保持一定距離；

S3，將離心套件安裝在離心機上，啟動離心機；

S4，將離心機轉速提升至轉速N₂，維持轉速N₂一段時間，其中轉速N₂產生的離心力使得離心瓶內的混合液經所述細小開口甩出至制片倉中并流向載玻片，直到制片倉中的混合液至少淹沒過所述細小開口，離心瓶與制片倉形成了單端開口的聯通管；液體不斷由離心瓶流入制片倉，離心瓶內的空間不斷增大，空間氣壓隨之變小，由于制片倉與大氣連通，制片倉內的液面始終受到大氣壓力，當離心瓶內的氣壓與液體離心力對制片倉液面產生的壓強之和等于大氣壓時，即離心力對制片倉液面所產生的壓強與離心瓶內負壓相等時，即離心瓶內的負壓與離心力平衡，在離心力的作用下，細胞不斷移動至處理液中，并持續向制片倉方向移動；

S5、離心機轉速增加至轉速N₁并維持一段時間；當離心瓶內的負壓再次與離心力達到平衡時，離心瓶內的液體流入制片倉的總體積不再增加，細胞依然持續通過細管流入制片倉，一部分細胞被載玻片上的粘附劑吸附；

S6，將離心機的轉速逐漸降低到轉速N₂并維持一段時間，使得制片倉中淹沒過所述細小開口的混合液被吸回離心瓶內，離心瓶內的細胞可以在離心力與負壓平衡時源源不斷地經細管向細小開口的方向移動；

S7，重復S5、S6步驟直至使足夠數量的細胞附著于載玻片上。

2.根據權利要求1所述的負壓平衡離心制片方法，其特征在于，所述細小開口與載玻片之間的距離為 0.5-15mm。

3.根據權利要求1所述的負壓平衡離心制片方法，其特征在于，所述細小開口的內徑為1-3mm。

4.根據權利要求3所述的負壓平衡離心制片方法，其特征在于，所述細管與所述離心瓶本體之間通過錐形體相連。

5.根據權利要求1所述的負壓平衡離心制片方法，其特征在于，所述轉速N₁范圍為 200-1000轉/分鐘，所述轉速N₂范圍為 100-900轉/分鐘。