[發明專利]一種用于篩選抗稻瘟病Pik位點新等位基因的引物和方法在審
| 申請號： | 202110382681.2 | 申請日： | 2021-04-09 |
| 公開（公告）號： | CN113122649A | 公開（公告）日： | 2021-07-16 |
| 發明（設計）人： | 周瑩;萬濤;邱文秀;王瓊;劉嵩 | 申請（專利權）人： | 武漢科技大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 武漢河山金堂專利事務所(普通合伙) 42212 | 代理人： | 胡清堂 |
| 地址： | 430060 *** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 篩選 稻瘟病 pik 位點新 等位基因 引物 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種用于篩選抗稻瘟病pik位點新等位基因的引物，其特征在于，所述引物為：
PikQ1P1-F：ACCCATTGCGAGAGGACCGAGAAA；
PikQ1P1-R：GAATAGGTCTGTGTTGCGAAATCT；
或
PikQ2P2-F：ATTGGACTATGGTGGAGACTGGGC；
PikQ2P2-R：CTAGTTCATGGCTACACCTCTCCC。
2.一種篩選抗稻瘟病pik位點新等位基因的方法，其特征在于，使用權利要求1所述的引物，具體包括以下步驟：
S1、從目標水稻的葉片中提取其基因組DNA；
S2、以步驟S1的基因組DNA為模板，使用PikQ1P1-F、PikQ1P1-R或PikQ2P2-F、PikQ2P2-R對其進行PCR擴增；
S3、對擴增產物進行測序、組裝后，與Pik-m基因的參考序列進行比對，根據插入或缺失數量進行新等位基因的篩選。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟S2所述PCR擴增條件如下：
反應體系：50μL，100ng模板DNA、0.2μL引物、5μL緩沖液、8μL dNTP混合物和2.5U Taq酶；
反應程序：94℃預變性5min；94℃變性1min 68℃退火和延伸5min，35個循環；72℃延伸5min。
4.含有權利要求1所述引物的檢測試劑盒。
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