[發(fā)明專利]一種防治根結(jié)線蟲的復(fù)合微生物菌肥及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110382511.4
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN112980738A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 江志陽;高立紅;尹微
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所;遼寧土木啟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;C05G3/00;C05G3/60;C05G3/80;C12R1/07;C12R1/79;C12R1/465
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

1.一種防治根結(jié)線蟲的復(fù)合微生物菌肥，其特征在于，按重量份數(shù)計(jì)，蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)ACCC 19287發(fā)酵液1～5份、淡紫擬青霉(Paecilomyceslilacinus(Thorn.)Samson)ACCC 30628發(fā)酵液1～5份、阿維菌素鏈霉菌(Streptomycesavermitilis)CGMCC 4.1253發(fā)酵液1～5份、黃腐酸20～30份、載體1～3份、保護(hù)劑2～4份；

所述的蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵液中活菌數(shù)≥1×10¹⁰cfu/ml，所述的淡紫擬青霉菌發(fā)酵液中活菌數(shù)≥5×10⁹cfu/ml，所述的阿維菌素鏈霉菌發(fā)酵液中活菌數(shù)≥1.5×10⁹cfu/ml。

2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物菌肥，其特征在于，所述的載體為碳酸鈣、稻殼粉或者硅藻土。

3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物菌肥，其特征在于，所述菌種保護(hù)劑為聚乙烯吡咯烷酮、吐溫80、羧甲醛纖維素鈉、丙三醇或甘露醇中的一種或兩種以上。

4.一種權(quán)利要求1所述的復(fù)合生物菌肥的制備方法，其特征在于，

(1)按上述重量份數(shù)，將蘇云金芽孢桿菌、淡紫擬青霉菌和阿維菌素鏈霉菌菌液分別經(jīng)載體吸附、烘干、粉碎，分別得到蘇云金芽孢桿菌菌粉、淡紫擬青霉菌菌粉和阿維菌素鏈霉菌菌粉，將三種菌粉混合，得到復(fù)合微生物菌劑；

(2)將所述復(fù)合微生物菌劑與黃腐酸及菌種保護(hù)劑混合均勻。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵液按如下方制備：

①將蘇云金芽孢桿菌接種到LB培養(yǎng)基中，于30～35℃、200～220r/min振蕩培養(yǎng)20～24h；

②將①蘇云金芽孢桿菌菌液劃線接種到NA培養(yǎng)基中，于30～35℃、培養(yǎng)24～48h；

③挑取②平板中的單菌落接種到NA培養(yǎng)基中，30～35℃、培養(yǎng)42～48h；

④將③中所得菌按5％(1g/L)的量接種到LB培養(yǎng)基中于30～35℃，200～220r/min振蕩培養(yǎng)7～8h，得到蘇云金芽孢桿菌種子液；

⑤將④種子液按5％的體積分?jǐn)?shù)的接種量轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐中，30～35℃，200～400r/min，罐壓0.05～0.1Mpa，連續(xù)培養(yǎng)22～28h，得活菌數(shù)≥1×10¹⁰cfu/ml的蘇云金芽孢桿發(fā)酵液。

6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，

所述步驟①中LB培養(yǎng)基每升組分如下：酵母浸粉5g，胰蛋白胨10g，氯化鈉10g，蒸餾水1000ml，pH 7.2；

步驟②中NA培養(yǎng)基每升組分如下：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂粉18g，蒸餾水1000ml，pH7.2～7.4；

步驟⑤蘇云金芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比：葡萄糖1％～1.5％，蛋白胨1％～1.2％，酵母浸粉0.6％～0.8％，磷酸二氫鉀0.2％～0.4％，七水硫酸亞鐵0.002％～0.0031％，七水硫酸鋅0.005％～0.007％，七水硫酸錳0.05％～0.08％，七水硫酸鎂0.03％～0.05％，余量為蒸餾水，消泡劑0.01％～0.05％，PH 7.4～7.6。