[發明專利]一種靶向金黃色葡球菌的抗菌肽及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110381046.2
• 申請日: 2021-04-09
• 公開（公告）號: CN113185599B
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發明（設計）人: 單安山;李家維
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/20;C07K1/04;A01N37/46;A01P1/00
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司 23101
• 代理人: 吳振剛

本發明提供了一種靶向金黃色葡球菌的抗菌肽及制備方法和應用。抗菌肽F6的序列如SEQ ID No.1所示。本發明以人髓化分樣蛋白MD?2的119?132片段為基礎片段，利用亮氨酸定點突變技術，構建出靶向革蘭氏陽性菌的抗菌肽F6。在最小抑菌濃度試驗和單細菌培養體系抗菌試驗中，本發明的F6多肽表現出了極強的抗金黃色葡球菌的抗菌能力，無革蘭氏陰性菌能力。在混合體系的選擇性殺菌試驗中，F6可以優先地殺滅金黃色葡萄球菌，對大腸桿菌幾乎無影響，表明其作為特異性抗革蘭氏陽性菌抗菌藥物及作為特異性抗革蘭氏陽性菌多肽分子探針的潛力。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種靶向金黃色葡球菌的抗菌肽及制備方法和應用。

背景技術

人類身體中共生著大量的微生物，現有研究已經表明共生微生物與人類生命活動息息相關。目前，抗生素的濫用使得細菌耐藥性問題受到重視?？咕淖鳛橐活愋》肿拥目咕镔|，由于獨特的抗菌機制，被認為是較為優秀的抗生素替代物。然而，正是由于其獨特的抗菌機制，抗菌肽對益生菌仍具有作用，容易造成微生物區系平衡失調，造成機體損傷。因此，對特異性病原菌具有特異殺滅能力的抗菌肽，極具應用前景。除此之外，由于缺少能夠移除特異性微生物的生物探針，了解特異微生物在微生物群落中所起的作用是十分困難的。現有的人源MD-2的119-132片段對于革蘭氏陽性菌無抗菌能力，只對革蘭氏陰性菌有抗菌能力，金黃色葡球菌屬于革蘭氏陽性菌，現需要一種能夠移除特金黃色葡球菌的生物探針，用于了解金黃色葡球菌在微生物群落中所起的作用。

發明內容

基于以上不足之處，本發明提供一種靶向金黃色葡球菌的抗菌肽F6，該抗菌肽是一種能夠專門殺滅金黃色葡球菌的靶向抗菌肽。

本發明所采用的技術如下：一種靶向金黃色葡球菌的抗菌肽F6，序列如SEQ IDNo.1所示。

本發明還公開一種靶向金黃色葡球菌的抗菌肽F6的制備方法，步驟如下：

(1)選取人的髓化分樣蛋白MD-2的119-132片段，采用定點氨基酸突變方法，利用亮氨酸替代第二位置絲氨酸、第四位置的賴氨酸和第七位置的賴氨酸；

(2)采用固相化學合成法通過多肽合成儀得到肽樹脂，將得到的肽樹脂經過TFA切割后，得到抗菌肽F6；

(3)經過反相高效液相色譜純化和質譜鑒定后，即完成抗菌肽F6的制備。

本發明還公開一種靶向金黃色葡球菌抗菌肽F6在制備專門消除金黃色葡球菌的特異性的多肽分子探針中的應用。

本發明的有益效果及優點：本發明的抗菌肽F6，對金黃色葡球菌具有很強的抗菌能力，對革蘭氏陰性菌抗菌能力弱。同時，在金黃色葡球菌和大腸桿菌的混合培養體系中，F6可以有效地殺滅金黃色葡球菌，對大腸桿菌的影響較小。本發明的抗菌肽F6可作為特異性的多肽分子探針，用于研究金黃色葡球菌在微生物群落中的作用。

附圖說明

圖1是抗菌肽F6在單細菌體系中對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌生存率的影響對比圖；

圖2是抗菌肽F6在革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌混合培養體系中，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌生存率的影響對比圖；

圖3是抗菌肽F6對小鼠巨噬細胞RAW264.7活性的影響圖。

具體實施方式

下面舉例對本發明做進一步的說明：

實施例1

將人源MD-2的119-132片段，采用定點氨基酸突變技術，利用亮氨酸替代第二位置絲氨酸、第四位置的賴氨酸、第七位置的賴氨酸。F6的序列及理化參數如表1所示。

表1 F6的序列及理化參數

實施例2