[發(fā)明專利]一種緩沖液及其在神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110380903.7
• 申請(qǐng)日: 2021-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN113092763B
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王法龍;劉聰;魏宏娟;李博飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京美聯(lián)泰科生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/573;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 宋秀蘭

本發(fā)明屬于免疫診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種緩沖液及其在神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。所述緩沖液，包括以下組分：三羥甲基氨基甲烷、KCl、十二水磷酸氫二鈉、硫酸鎂、海藻糖、BSA。該緩沖液能夠用于制備檢測(cè)NSE的試劑盒，該試劑盒能夠快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)人外周血中神經(jīng)元特異性烯醇化酶的含量，操作簡(jiǎn)便、能為小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腎母細(xì)胞瘤提供輔助診斷的體外診斷試劑盒及其制備方法和使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于試劑盒制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種緩沖液及其在神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron-Specific Enolase，NSE)是一種分子量約78000的酸性蛋白酶。NSE是小細(xì)胞肺癌的重要標(biāo)志物之一，可用于鑒別診斷，以及檢測(cè)小細(xì)胞肺癌放療、化療后的治療效果。NSE還可用于神經(jīng)母細(xì)胞瘤和腎母細(xì)胞瘤的鑒別診斷，對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤的早期診斷亦有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

現(xiàn)有技術(shù)的檢測(cè)方法有多種，包括ELISA、FIA、板式化學(xué)發(fā)光等方法，但在ELISA、FIA、板式化學(xué)發(fā)光等方法學(xué)中NSE的靈敏度和穩(wěn)定性一直不盡如人意，嚴(yán)重影響了NSE在疾病檢測(cè)中的應(yīng)用。且以上方法學(xué)的檢測(cè)時(shí)間一般在30分鐘-1.5小時(shí)之間，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，不利于患者診療。

如中國(guó)專利申請(qǐng)CN 109187971A提供一種神經(jīng)元特異性烯醇化酶化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒及其制備方法，屬于體外檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。該試劑盒包括：鏈霉親和素磁顆粒懸浮液、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的神經(jīng)元特異性烯醇化酶單克隆抗體和偶聯(lián)標(biāo)記物標(biāo)記的神經(jīng)元特異性烯醇化酶單克隆抗體。

中國(guó)專利申請(qǐng)CN 106645700A一種快速診斷神經(jīng)元特異性烯醇化酶試劑盒及其使用方法，該試劑盒包含神經(jīng)元特異性烯醇化酶標(biāo)準(zhǔn)品、反應(yīng)緩沖液、清洗液、脂質(zhì)體復(fù)合物、磁性分離試劑。所述的脂質(zhì)體復(fù)合物為內(nèi)部包裹有聯(lián)吡啶釕Ru(bpy)32+和納米金粒子復(fù)合物，表面包被有抗神經(jīng)元特異性烯醇化酶抗體，所述的納米金粒子為粒徑在2～50nm的類球形納米金。所述的磁性分離試劑由生物素化合的抗神經(jīng)元特異性烯醇化酶抗體和鏈霉親和素包被的磁性微粒制備而成。

但現(xiàn)有技術(shù)中均存在檢測(cè)過程和靈敏度不可兼得的情況。本發(fā)明的目的是為了能夠快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)人外周血中神經(jīng)元特異性烯醇化酶的含量，而提供的一種操作簡(jiǎn)便、能為小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腎母細(xì)胞瘤提供輔助診斷的體外診斷試劑盒及其制備方法和使用。

發(fā)明內(nèi)容

為克服以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種緩沖液，該緩沖液能夠用于制備檢測(cè)NSE的試劑盒，該試劑盒能夠快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)人外周血中神經(jīng)元特異性烯醇化酶的含量，操作簡(jiǎn)便、能為小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腎母細(xì)胞瘤提供輔助診斷的體外診斷試劑盒及其制備方法和使用。

為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：

一種緩沖液，包括以下組分：三羥甲基氨基甲烷(Tris)、氯化鉀(KCl)、十二水磷酸氫二鈉、硫酸鎂、海藻糖、牛血清白蛋白(BSA)。

優(yōu)選地，按照重量份數(shù)計(jì)，所述緩沖液包括如下組分：三羥甲基氨基甲烷4-20份、KCl6-25份、十二水磷酸氫二鈉1-6份、硫酸鎂0.1-10份、海藻糖5.0-50份、BSA 1.0-50份。

優(yōu)選地，按照重量份數(shù)計(jì)，所述緩沖液包括如下組分：三羥甲基氨基甲烷4.2-15.6份、KCl 8.5-24份、十二水磷酸氫二鈉1.2-5.8份、硫酸鎂0.1-10份、海藻糖5.0-50份、BSA1.0-50份；

優(yōu)選地，所述緩沖液的制備方法，包括以下步驟：

(1)稱取Tris、KCl、NaH₂PO₄、MgSO₄、海藻糖、牛血清白蛋白，加入到純化水中攪拌至完全溶解，調(diào)試pH值，并定容；

(2)用濾膜進(jìn)行過濾，即可。