[發明專利]一種珊瑚致病菌的益生菌篩選及防治方法

在審

• 申請號: 202110363449.4
• 申請日: 2021-04-02
• 公開（公告）號: CN113425858A
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 蘇宏飛;張琦;余克服;王英輝;陸春蓉;黃沁愉;蔣學建;陳凡;秦曉;謝如楓;任天飛
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K35/741;A61P31/04;C12Q1/04;C12Q1/18
• 代理公司: 南寧智卓專利代理事務所(普通合伙) 45129
• 代理人: 鄧世江

本發明公開一種珊瑚致病菌的益生菌篩選及防治方法，包括以下步驟：通過拮抗實驗篩選針對目標致病菌的潛在益生菌，獲得多株針對目標致病菌具有拮抗作用的潛在益生菌，選取其中一種拮抗能力強的潛在益生菌和生長狀態良好的珊瑚樣本用于珊瑚致病菌防治實驗。通過比較單獨添加有海水，單獨添加有致病菌，單獨添加有益生菌，同時加致病菌與益生菌，提前五小時加益生菌后加致病菌，將海水、目標致病菌、目標益生菌按照分組接種于珊瑚上，通過觀察珊瑚上蟲黃藻數量變化、光合效率和珊瑚表觀形態變化判斷目標益生菌是否能對目標致病菌有防治作用及效果。本發明防治珊瑚致病菌的方法科學可靠，對保護珊瑚礁資源和提高珊瑚人工移植成活率有重大意義。

技術領域

本發明涉及珊瑚疾病防治技術領域，具體涉及一種珊瑚致病菌的益生菌篩選及防治方法。

背景技術

珊瑚礁生態系統是初級生產力最高的海洋生態系統之一，具有極高的生物多樣性和重要的經濟價值。然而，近幾十年來，珊瑚礁逐漸退化。據Mulhall M等調查，1980年代初到2000年，珊瑚礁的總面積已從約60萬平方公里，減少到約25萬平方公里。導致珊瑚礁退化的因素很多，包括自然環境因素(氣候變化、海洋酸化、厄爾尼諾、漂白、旋風)和人為因素(炸藥捕魚、過度使用生物資源、沖洗農田、化學污染)以及生物因素(海星攝食、大型藻類競爭、病原微生物)。其中，病原微生物是導致珊瑚退化重要原因之一。由于環境因素及人為因素的影響，珊瑚的免疫能力下降，從而進一步使珊瑚更易受到病原菌的感染及危害。迄今為止，已經發現的由病原微生物導致的珊瑚疾病已經波及106種珊瑚，范圍遍及54個國家。

在2002年，Y.Ben-Haim等人從患病的鹿角杯形珊瑚中分離得到Vibriocoralliilyticus，并且通過科赫法則驗證了Vibrio coralliilyticus為鹿角杯形珊瑚的病原菌。Vibrio coralliilyticus是一種溫度依賴性的病原菌，在高于27℃時就可以導致鹿角杯形珊瑚的蟲黃藻裂解和組織脫落，進而導致珊瑚白化。21世紀以來，Vibriocoralliilyticus引起珊瑚白化的事件頻發，因此，探索Vibrio coralliilyticus引起鹿角杯形珊瑚白化的防治尤為重要。

現在主要對珊瑚疾病采用的防治方法主要包括：物理方法、抗生素療法、益生菌療法、噬菌體療法這幾種。其中，益生菌療法為本發明主要探討的方法，益生菌療法在水生生物疾病防治中已得到多數學者證實并應用。朱正祥等發現在飼料中添加適宜濃度丁酸梭菌可以改善鯉機體免疫力，調節腸道菌群結構，并且抑制有害菌群增殖；谷舞等發現其獲得的益生芽孢菌對對蝦生長發育及抗病能力方面有益生作用，且提升凡納濱對蝦抗副溶血弧菌感染的能力。近兩年，在珊瑚疾病防治中益生菌療法也被證明有一定的效果，PhillipeM.Rosado等人發現使用益生菌團可以緩解Vibrio coralliilyticus導致的珊瑚白化。然而，對于Vibrio coralliilyticus導致的鹿角杯形珊瑚的白化尚未有較好的防治方法。因此，本發明提供對于目標致病菌一種防治方法具有重要的意義。

本發明涉及的目標致病菌株為Vibrio coralliilyticus，目標益生菌株為GXUZ9。本發明對目標益生菌菌株GXUZ9是否具有防治目標菌株引起的珊瑚疾病進行了鑒定，并以提前用目標益生菌處理珊瑚的思路來防治致病菌導致的疾病。

發明內容

本發明的目的在于針對現有鹿角杯形珊瑚致病菌的防治的不足，提供一種針對珊瑚致病菌的潛在益生菌篩選及利用益生菌防治致病菌導致的珊瑚疾病方法。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種珊瑚致病菌的潛在益生菌篩選及防治方法，其特征在于，所述篩選方法包括如下步驟：

(a1)樣本選擇：采集生長狀態良好的健康珊瑚，置于養殖池中適應至少15d；

(a2)菌株培養：將待篩選菌株和目標致病菌菌株分別接種于液體培養基中，搖床培養，測定菌株的OD₆₀₀值并制作其生長曲線；