[發明專利]一種能產生抗卡痛單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110345124.3
• 申請日: 2021-03-30
• 公開（公告）號: CN113122506B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 鄭智彪;鄭曙劍
• 申請（專利權）人: 杭州隆基生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/16;C07K14/765;C07K1/107;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/532;G01N33/558;C07D471/14
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏;何俊

本發明涉及生物檢測領域，本發明公開了一種能產生抗卡痛單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其制備方法和應用。該雜交瘤細胞株命名為Kratom11B7，已于2021年1月31日保藏于中國典型培養物保藏中心；保藏號為CCTCCNO：C202146。其制備方法包括：步驟1：帽柱木堿完全抗原的制備；步驟2：7羥基帽柱木堿完全抗原的制備；步驟3：雜交瘤細胞株的制備：用帽柱木堿完全抗原和7羥基帽柱木堿完全抗原共同免疫小鼠。本發明雜交瘤細胞株Kratom11B7分泌產量高，分泌得到的抗卡痛單克隆抗體具有高親和力、高特異性、高靈敏度特點。本發明采用連續免疫法，可有效節省抗原用量、縮短免疫時間。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，尤其涉及一種能產生抗卡痛單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其制備方法和應用。

背景技術

卡痛，茜草科，是一種生長在東南亞的精神活性植物，特別是在泰國和馬來西亞。.新鮮或者干燥的卡痛葉可以通過吸食、咀嚼或泡茶食用。低劑量的卡痛有刺激作用，長期以來被東南亞體力勞動者作為興奮劑來抵消工作疲勞使用；高劑量的卡痛具有鎮靜-麻醉效果，所以卡痛葉被作為傳統毒品和鴉片的替代品。

卡痛的藥理功能主要是通過生物堿7-羥基帽柱木堿(式II)和帽柱木堿(式I)實現的。雖然這些生物堿分子的結構和致幻劑相似，但是這些物質沒有致幻劑活性。相反地，這些生物堿主要與腎上腺素和阿片受體相互作用。因此，常常用來阻止或緩解阿片類藥物依賴患者的戒斷癥狀，或者被用來降低對阿片類藥物的依賴。由于卡痛葉的延緩戒斷綜合征作用，其也有一定的被濫用為毒品的風險。研究發現食用卡痛后會出現口干、出汗、頭暈、排尿增加或減少、食欲下降以及惡心或嘔吐。長期使用可能產生的副作用有厭食和體重下降、失眠、煩躁不安、睡眠障礙、出現幻覺以及產生依賴性。

據美國《紐約時報》，在泰國，卡痛葉的來源豐富，其生物堿的提前提取方法簡單，現在流行一種卡痛葉制成的″毒品雞尾酒″，很多青少年已經淪為卡痛葉成癮者。通常將從卡痛葉中提取的汁液與止咳糖漿、可口可樂和冰塊混合而成。卡痛在其天然狀態下具有相對的安全性，高濃度的生物堿類提取物比未經加工的葉片更具危害性，而且，卡痛若與鎮靜劑如酒精等混合使用，有可能產生累加效應。與任何共同吞下的物質相互摻雜或污染也是風險之一。在歐洲，非法摻入了未公開的合成阿片受體激動劑O-去甲基曲馬多以及咖啡因等其他物質的某些品牌的卡痛已被曝光。2010～2011年瑞典有9人的死亡便與摻入了幾種其他物質而非純天然卡痛的卡痛制品有關。因此，建立特異性強，靈敏度高的卡痛檢測抗體意義重大。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種能產生抗卡痛單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其制備方法和應用。本發明雜交瘤細胞株Kratom11B7分泌產量高，分泌得到的抗卡痛單克隆抗體能同時檢測帽柱木堿和7-羥基帽柱木堿，能更好的檢測食用卡痛葉、卡痛葉提取物及其衍生物。且其具有高親和力、高特異性、高靈敏度特點。本發明采用連續免疫法，可有效節省抗原用量、縮短免疫時間。

本發明的具體技術方案為：

第一方面，本發明提供了一種能產生抗卡痛單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其命名為雜交瘤細胞株Kratom11B7，已于2021年1月31日保藏于中國典型培養物保藏中心；保藏號為CCTCCNO：C202146。

第二方面，本發明提供了一種雜交瘤細胞株的制備方法，包括以下步驟：

步驟1：帽柱木堿完全抗原的制備：以帽柱木堿為原料，先用三氟乙酸酐保護仲胺基，再用氫氧化鋰水解甲酯得到羧基，在羧基位點引入5-氨基戊酸增加臂長，得到帽柱木堿半抗原，通過碳二亞胺法使帽柱木堿半抗原偶聯載體蛋白后，脫去保護基，得到帽柱木堿完全抗原。