[發明專利]一種生物體或組織中dsRNA及提取該dsRNA的方法

有效

• 申請號: 202110334831.2
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號: CN112961851B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 章松柏;王寅;劉明宏;王小彥;管何冉
• 申請（專利權）人: 貴州省煙草公司遵義市公司;長江大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/113
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 丁倩

1.從生物體或組織中提取dsRNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、獲取生物體或組織，粉碎后混入有機試劑進行處理，離心；

S2、取離心上清液，混入提取試劑作為上樣液上樣層析柱，促使上樣液中dsRNA可逆性地吸附于層析柱中的填料上；

S3、采用第一溶液和第二溶液依次對層析柱中填料進行分段洗脫，得到第一洗脫液和第二洗脫液，收集所述第二洗脫液進行后續處理以得到最終的dsRNA；

所述有機試劑為苯酚、氯仿、異戊醇的混合溶液；

所述提取試劑包含16％wt的乙醇；

所述填料為硅化微晶纖維素粉；

所述硅化微晶纖維素粉在層析柱中沉降壓實并到達層析柱的3/4處，所述層析柱上端連接有細管且下端連接有蠕動泵；

所述第一溶液為包含16％wt乙醇的STE緩沖溶液，所述第二溶液為STE緩沖溶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，苯酚、氯仿和異戊醇的體積比為25:24:1。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1步驟中，先將粉碎的粉末混入STE緩沖溶液，后再與等體積的所述有機溶劑進行混合。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述S3步驟中，后續處理包括以下步驟：

向所述第二洗脫液中加入異丙醇，于-20℃條件下冷凍；離心，取沉淀；及加入乙醇水溶液后再次離心，取沉淀，用DEPC溶解后于-20℃條件保存。

5.權利要求1-4任一項所述的方法制備得到的包含于生物體或組織中的dsRNA。