[發明專利]一種用于修復宮腔粘連的生物組合物及其制備方法

在審

• 申請號: 202110331876.4
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號: CN113041258A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 趙云霞;林樹
• 申請（專利權）人: 林樹;施琦蓉
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K9/06;A61P15/00;C12N5/0775
• 代理公司: 泉州市博一專利事務所(普通合伙) 35213
• 代理人: 洪淵源

一種用于修復宮腔粘連的生物組合物，包括ShakeGel^TM3D和通過流式、成脂誘導分化、成骨誘導分化、成軟骨誘導分化鑒定的自體ADSCs，按體積1：1均勻混合而成。該生物組合物的制備方法包括：從分離提取自體ADSCs，通過流式、成脂誘導分化、成骨誘導分化、成軟骨誘導分化鑒定ADSCs，再與ShakeGel^TM3D結合培養。本發明ShakeGel^TM3D可為自體ADSCs創造一個可行的三維生長環境，ShakeGel^TM3D與自體ADSCs組合物的聯合移植通過增加BMP7?Smad5信號轉導促進受損子宮內膜組織的恢復，使子宮內膜增厚，腺體數量增加，纖維化減少，從而使宮腔粘連的小鼠生育能力恢復。

技術領域

本發明涉及汽車生物技術領域，更為具體地說是指一種用于修復宮腔粘連的生物組合物及其制備方法。

背景技術

宮腔粘連(Intrauterine adhesion, IUA)是由于子宮內膜基底層損傷引起的子宮腔和/或子宮頸管部分或完全閉塞，它也是子宮不孕癥最常見的原因。目前關于IUA的發病機制有多種假說，包括纖維化增生理論、神經反射理論、干細胞分化異常、宮腔微環境改變及纖維化、信號通路調控異常、促進炎癥反應等。由于IUA的病理特征屬于子宮內膜纖維化，因此纖維化增生理論是目前研究最廣泛的假說。宮腔粘連是子宮手術的一種嚴重并發癥，可導致女性生殖系統成千上萬的健康問題，如月經異常、反復流產、周期性腹痛、不孕癥和妊娠相關并發癥。因此，重建一個正常的宮腔，恢復子宮功能是IUA治療的目標。

宮腔粘連的傳統治療方法是宮腔鏡下粘連切除后再結合各種輔助治療的應用。然而，這些抗粘連策略有一些缺點和不足，如二次手術的復發、隔離面積有限、宮內炎癥反應的誘導、子宮內膜再生困難等，這些迫使宮腔粘連的繼續研究并探索新的治療方案。為此，我們提供一種用于修復宮腔粘連的生物組合物及其制備方法。

發明內容

本發明提供一種用于修復宮腔粘連的生物組合物及其制備方法，為宮腔粘連患者提供良好的治療藥劑。

本發明采用如下技術方案：

一種用于修復宮腔粘連的生物組合物，包括ShakeGel^TM3D凝膠液和通過流式、成脂誘導分化、成骨誘導分化、成軟骨誘導分化鑒定的自體脂肪間充質干細胞，按體積1：1均勻混合而成。

進一步地，所述自體脂肪間充質干細胞從動物腹股溝的白色脂肪組織中提取。

本發明還提供一種用于修復宮腔粘連的生物組合物的制備方法，包括以下步驟：

（1）、提取與培養小鼠的自體脂肪間充質干細胞；（2）、對步驟（1）的脂肪間充質干細胞進行成骨誘導、成脂誘導分化以及成軟骨誘導分化處理；（3）、取步驟（2）處理后的脂肪間充質干細胞上清培養液進行流式細胞分析；（4）、在狀態良好的脂肪間充質干細胞加入GFP慢性病毒培養基混合液繼續培養；（5）、將ShakeGel^TM3D凝膠液與步驟（4）培養得到的自體脂肪干細胞按體積1：1進行離心混勻，制得生物組合物。

進一步地，上述步驟（1）小鼠自體脂肪間充質干細胞的提取和培養過程如下：1）剝離并收集3-4周齡的雌性小鼠腹股溝脂肪組織，放入裝有提前預熱至37℃KRP buffer的離心管中；2）將脂肪組織從KRP buffer轉移到細胞培養皿，采用預熱的PBS洗滌兩次，按照體積比4：1放入新的KRP buffer，并將脂肪組織剪碎成小塊；3）吸取上層脂肪懸浮物加入到新的無菌試管，加入等體積濃度為0.75mg/ml的膠原酶Ⅱ；4）將無菌試管密封后放入37℃水浴緩慢搖動45分鐘，使脂肪懸浮物消化到分離細胞層懸浮在液體最上層與其它沉淀的組織碎片分開時，加入預熱的PBS，中和膠原酶Ⅱ，終止消化；5）離心分離脂肪干細胞沉淀，吸棄上層混合液；6）加入紅細胞裂解液重懸沉淀，裂解10min，再離心摒棄上清液，留下脂肪干細胞沉淀；7）將脂肪干細胞培養基重懸細胞沉淀鋪在細胞培養皿中。