[發明專利]飼料中斑蝥黃的測定方法

在審

• 申請號: 202110331692.8
• 申請日: 2021-03-29
• 公開（公告）號: CN113009045A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 王鳳芹;曹進平;汪以真;路則慶;程遠之
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

本發明公開一種飼料中斑蝥黃的測定方法。試樣中斑蝥黃經水分散、乙醇和二氯甲烷提取，配合飼料和濃縮飼料的提取液用HLB小柱凈化，添加劑預混合飼料的提取液則直接稀釋。試樣經反相高效液相色譜儀分離，外標法定量試樣中全反式斑蝥黃和順式斑蝥黃的總量。該方法能夠滿足飼料中斑蝥黃順反異構體的快速、準確測定需要。

技術領域

本發明涉及一種飼料中斑蝥黃的測定方法。

背景技術

斑蝥黃又稱角黃素、斑蝥黃質（Canthaxanthin），是一種重要的類胡蘿卜素類紅色色素，化學結構式見圖1，化學名稱為β，β—胡蘿卜素—4，4—二酮，主要有全反式（圖1）和順式（圖2）異構體。天然的斑蝥黃存在于水果、蔬菜、蘑菇、藻類、蛋、甲殼類動物和各種魚中。斑蝥黃可通過微生物培養或化學合成進行生產，因其分子中存在共軛雙鍵結構，穩定性差，對氧氣、氧化劑、熱和濕都十分敏感，在產品生產、保存和銷售過程中必須進行保護，常用的方法是將其進行微囊包被，制成各種規格的水溶性預混劑。1984年FDA/WHO批準斑蝥黃列入食品添加劑并制定了質量標準。在飼料方面，斑蝥黃用作魚類和禽類飼料的著色劑，以增強魚類肉體的顏色和禽類皮膚的顏色以及蛋黃的顏色。2013年我國飼料添加劑目錄規定斑蝥黃僅適用于家禽。就像其他類胡蘿卜色素一樣，它是一種有效的抗氧化劑，但是攝取過量的斑蝥黃則可能在動物和人的視網膜上沉積，導致視覺問題。為此，2003年英國對于肉禽和蛋禽飼料中斑蝥黃的添加量予以規定，在肉禽和蛋禽配合飼料中添加量分別不超過25 mg/kg和8 mg/kg。2017年我國農業農村部也做出了同樣的限制（農業農村部公告第2625號）。

目前，關于斑蝥黃的檢測，主要有分光光度計法、薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）、高效液相色譜-質譜聯用法（HPLC-MS）等。王云全等制定了關于飼料添加劑斑蝥黃的國家標準（GB/T 18970-2003），用水、無水乙醇和三氯甲烷混合溶液水浴超聲提取試樣中的斑蝥黃后，再采用分光光計法對其定量；Tolass等建立了測定鮭魚中斑蝥黃含量的方法，先使用丙酮溶液對斑蝥黃進行萃取，再經裝填硅膠的玻璃柱對樣品進行脫脂處理。使用丙酮-正己烷混合溶液作為展開劑，用TLC法定量分析斑蝥黃；農業農村部標準NY/T 2896-2016建立了飼料中斑蝥黃測定的HPLC法，試樣中斑蝥黃經無水乙醇和二氯甲烷提取，經氮氣保護濃縮后復溶，正相HPLC分離，紫外檢測器檢測，外標法測定斑蝥黃的含量；國家標準GB/T 22958-2008 建立了河豚魚、鰻魚和烤鰻中斑蝥黃殘留量測定的HPLC-MS法，該方法使用乙腈提取試樣中的斑蝥黃，并用正己烷進行脫脂、凈化處理，HPLC-MS檢測，外標法定量。

上述斑蝥黃定量方法中，分光光度計法操作簡單，成本較為低廉，但是其測定的濃度范圍十分有限，僅適用于添加量為10%及以上以噴霧法工藝制造的斑蝥黃飼料添加劑，而TLC法操作步驟繁多，較為復雜，重復性較差。HPLC-MS法測定試樣中斑蝥黃，具有結果準確可靠、回收率和精密度好等優點，但HPLC-MS儀器貴重，在普通的飼料廠和養殖場不能普及。HPLC法是測定類胡蘿卜素最常見的方法，該方法簡便、快速、準確、重復性好，能夠滿足檢測機構在實際檢測中的定性和定量要求。

現行標準NY/T 2896-2016（飼料中斑蝥黃的測定高效液相色譜法）在實驗過程中采用甲苯配制標準品，采用丙酮、二氯甲烷等有機溶劑對飼料樣品中的斑蝥黃進行提取，并應用正相HPLC法分析。

發明內容

針對現有飼料中斑蝥黃定量分析斑蝥黃提取不完全、純化步驟缺乏或過于復雜、定量時忽略順式斑蝥黃含量等系列問題，本發明的目的是提供飼料中斑蝥黃的測定方法。