[發明專利]一種草木樨毛狀根轉化方法有效
| 申請號： | 202110330271.3 | 申請日： | 2021-03-29 |
| 公開（公告）號： | CN112795590B | 公開（公告）日： | 2022-11-01 |
| 發明（設計）人： | 張吉宇;王升升;段珍;吳凡 | 申請（專利權）人： | 蘭州大學 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;A01H5/06;A01H6/54;A01C1/00;A01C1/08;A01C1/02;A01G22/40 |
| 代理公司： | 廣西中知華譽知識產權代理有限公司 45140 | 代理人： | 吳震輝 |
| 地址： | 730030 甘肅*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種草 木樨 毛狀根 轉化 方法 | ||
1.一種草木樨毛狀根轉化方法，其特征在于，所述方法包括：制備帶有目的基因的發根農桿菌菌膜、制備草木樨幼苗、將農桿菌轉染到草木樨中、培養后幼苗除菌、除菌后對幼苗進行發根處理；
所述制備草木樨幼苗的方法為：將草木樨種子進行滅菌處理后，將種子放入4℃的冰箱中催化2d，之后放入25℃培養箱中采用交替光處理進行培養，培養時間為3d，下胚軸長至不低于5 mm時完成草木樨的幼苗制備；
所述將農桿菌轉染到草木樨中的處理方法包括草木樨切根和侵染兩個步驟，其中，草木樨切根的方法為：用手術刀在根尖往上5 mm處快速切斷，然后放于含有少量無菌水的培養皿培養；侵染方法為：將草木樨的切口端劃過發根農桿菌菌膜蘸取少量農桿菌，然后放置于不含抗生素的1/2的MS培養基中，用封口膜封好后，用錫箔紙包住立放在22℃組培室進行避光處理，培養3天即完成轉染過程；
所述幼苗除菌方法為：在黑暗處理時，將轉染后的草木樨取出，將其將放置于含有250mg/L頭孢霉素和250 mg/L 羧芐青霉素的滅菌水中，在28 ℃搖床120 rpm除菌30 min，滅菌水沖洗3遍，將幼苗放入含有250 mg/L頭孢霉素和250 mg/L 羧芐青霉素的1/2MS培養基中，用封口膜封好后，立放在22℃組培室中采用交替光處理進行培養5天；
所述除菌后對幼苗進行發根處理的方法為：將幼苗從固體培養基中移入營養液中，放置在22 ℃組培室進行交替光處理，直至幼苗長出發根；
所述交替光處理的方法為：采用16 h光照處理，8 h黑暗處理；
所述1/2的MS培養基由如下成分組成：MS 2.22 g、蔗糖8.0 g、7.0 g瓊脂；
所述營養液中，1L營養液包含有如下重量的物質：25 mg FeSO4·7H2O，33.5 mg EDTA-Na，98.6 mg MgSO4·7H2O，69.7 mg K2SO4，117.6 mg CaCl2·2H2O, 34.8 mg K2HPO4，0.711mg H3BO3，0.445 mg MnCl2·4H2O，0.037 mg CuSO4·5H2O，0.102 mg ZnCl2，0.012 mgNa2MoO4·2H2O。
所述草木樨為白花草木樨。
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