[發(fā)明專利]一種快速提取高質(zhì)量DNA的試劑及方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110326511.2 | 申請日： | 2021-03-26 |
| 公開（公告）號： | CN113046347A | 公開（公告）日： | 2021-06-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 楊悅;李大鵬 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 張雪 |
| 地址： | 271018 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 提取 質(zhì)量 dna 試劑 方法 | ||
1.一種快速提取高質(zhì)量DNA的試劑，其特征在于，包括：
1)提取緩沖液，其包括：2％溴化十六烷基三甲基銨，100mM、pH8.0 Tris-HCl，20mM、pH8.0乙二胺四乙酸，1.4M NaCl和2％β-巰基乙醇；
2)終濃度為3.5mg/mL的RNA水解酶A；
3)抽提劑，包括酚、氯仿和異戊醇的混合液，所述混合液中酚：氯仿：異戊醇體積比為25：24：1。
2.一種快速提取高質(zhì)量DNA的方法，其特征在于，包括利用權(quán)利要求1所述的試劑提取真菌中DNA的步驟。
3.如權(quán)利要求2所述的快速提取高質(zhì)量DNA的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
步驟1：收集真菌菌絲體，并進(jìn)行預(yù)處理后，在液氮環(huán)境中研磨成粉末；
步驟2：將粉末加入預(yù)熱的提取緩沖液中，混合均勻，再于65℃水浴保溫20-30min，期間每隔5-10min顛倒混勻一次；所述提取緩沖液包括：2％溴化十六烷基三甲基銨，100mM、pH8.0 Tris-HCl，20mM、pH8.0乙二胺四乙酸，1.4M NaCl和2％β-巰基乙醇；
步驟3：步驟2反應(yīng)液冷卻至室溫后，將等體積抽提劑進(jìn)行抽提，混合均勻，之后再離心，棄沉淀取上清液；所述抽提劑為酚：氯仿：異戊醇體積比為25：24：1的混合液；
步驟4：向步驟3所得上清液中加入終濃度為3.5mg/mL的RNA水解酶A，高溫消化以去除RNA；
步驟5：冷卻至室溫后，向步驟4反應(yīng)液中加入等體積的所述抽提劑，重新抽提、離心，棄沉淀取上清液；
步驟6：向步驟5所得上清液中加入等體積的氯仿和異戊醇混合液，混合均勻再離心，棄沉淀取上清；
步驟7：向步驟6所得上清液中加入預(yù)冷的異丙醇，混合均勻，-20℃條件下放置20-30min，沉淀DNA；再離心，棄上清液取沉淀；
步驟8：用75％乙醇洗滌步驟7所述沉淀2-3次，37℃條件下,干燥20-30min后，加無菌水溶解沉淀，-20℃保存。
4.如權(quán)利要求3所述的快速提取高質(zhì)量DNA的方法，其特征在于，步驟2中所述粉末和提取緩沖液的質(zhì)量體積比1-3:10。
5.如權(quán)利要求3所述的快速提取高質(zhì)量DNA的方法，其特征在于，步驟3、步驟5、步驟6-7中所述離心條件均為：10000-15000r/min離心10-15min。
6.如權(quán)利要求3所述的快速提取高質(zhì)量DNA的方法，其特征在于，步驟4中所述RNA酶消化條件為：65℃水浴30min。
7.如權(quán)利要求3所述的快速提取高質(zhì)量DNA的方法，其特征在于，所述氯仿和異戊醇混合液中氯仿:異戊醇體積比為24:1。
8.如權(quán)利要求3所述的快速提取高質(zhì)量DNA的方法，其特征在于，步驟7中所述預(yù)冷的異丙醇加入體積為上清液中的2/3體積。
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