[發明專利]一種檢測非洲豬瘟病毒IgA抗體的ELISA檢測方法及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202110317194.8
• 申請日: 2021-03-25
• 公開（公告）號: CN113063941A
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 王云峰;王牟平;董明奇
• 申請（專利權）人: 哈爾濱國生生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/58
• 代理公司: 北京象合知識產權代理事務所(普通合伙) 11893
• 代理人: 封明艷;鄭慧娟

本發明提供一種針對非洲豬瘟的抗體檢測方法，該檢測方法以非洲豬瘟病毒采集豬的口腔拭子、鼻腔拭子、肛門拭子、陰道拭子或乳汁為檢測樣品，通過ELISA抗體檢測方法獲得檢測樣品中IgA的含量，從而對檢測豬的感染及免疫情況作出判斷，或進一步結合檢測豬的抗原檢測結果對感染情況作出判斷。本發明的方法采樣簡單、敏感性好、特異性強、且能徹底消除由于采血引起交叉感染的風險。

技術領域

本發明涉及抗體檢測領域，尤其涉及非洲豬瘟病毒抗體的檢測試劑及方法。

背景技術

非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)引起的家豬和野豬的烈性傳染病，為世界動物衛生組織(OIE)規定必須申報的一類動物疫病，給疫區國家造成了巨大的經濟損失(Costard et al.,2013)。ASFV為一大的有囊膜的雙鏈DNA病毒，屬于非洲豬瘟病毒科(Asfarviridae)、非洲豬瘟病毒屬(Asfivirus)成員(Dixon et al.,2013)。

在2018年8月份，非洲豬瘟在我國開始發生后，給我國生豬產業造成了巨大損失，同時給我國的“肉籃子”及食品安全帶來巨大威脅。由于該病毒的本身特性，到目前為止，還沒有安全有效的疫苗。防控主要是利用檢測技術進行生物安全構建和清除感染豬。

目前非洲豬瘟的檢測技術主要有兩大類。一類是抗原檢測，一類是抗體檢測。抗原檢測主要是采用熒光PCR的方法，對豬的組織(如：血液、唾液、臟器等)和環境樣品(飼料、水、豬舍的表面采集樣品)進行檢測，排查感染豬和檢測環境，防止非洲豬瘟病毒感染豬群。抗體檢測主要是用ELISA方法對血清進行檢測，對感染非洲豬瘟病毒的無癥狀豬或者是耐過豬進行檢測，排查到感染豬進行淘汰。抗體檢測解決了抗原檢測中存在假陰性這一技術漏洞，是抗原檢測的必要補充。兩種檢測方法的聯合應用，會大幅提高非洲豬瘟的防控效率和效果。

由此可見，非洲豬瘟抗體檢測是防控該病的重要技術手段。目前的抗體檢測是通過ELISA方法對血清中的IgG進行檢測，該方法需采集豬的血液后分離血清進行檢測。雖然檢測血液中的IgG是常用的抗體檢測方法，但是該檢測方法首先需要保定豬、然后采血、分離血清后才能進行檢測。方法不但費時費力，主要是需要對體積和重量較大的豬尤其是體重在100kg左右的豬來講，保定是難度很大的。同時，采血的操作容易造成豬皮膚出現創口，患豬血液中非洲豬瘟病毒含量很高，有造成交叉感染的風險。基于以上原因，針對非洲豬瘟的檢測，市場需要采樣簡單、檢驗準確并能消除交叉感染風險的檢測方法。

發明內容

免疫球蛋白A(簡稱為IgA)分兩種類型：即血清型IgA和分泌型IgA。血清型IgA存在于血清中，血清IgA具有某些IgG和IgM的免疫功能，特異性IgA能中和血液中的抗原。分泌型IgA存在于黏膜的分泌液中，例如：唾液、鼻腔液體、淚液、肛門粘膜處的液體、陰道液體以及乳汁當中，均含有IgA抗體。分泌型IgA是機體局部黏膜抗感染免疫的主要抗體。故又稱黏膜免疫抗體。它能抑制微生物在呼吸道上皮附著，減緩病毒繁殖，有重要的免疫屏障作用，對某些病毒、細菌和—般抗原具有抗體活性，是防止病原體入侵機體的第一道防線。

機體內IgA的含量低于IgG，因此，針對病毒的抗體檢測方法多以血清中的IgG為檢測對象。我們的研究以IgA為檢測對象，通過特定的檢測手段，建立了非洲豬瘟病毒IgA的ELISA抗體檢測方法，該方法避免了血液采樣，通過非洲豬瘟病毒采集豬的口腔拭子、鼻腔拭子、肛門拭子、陰道拭子或乳汁為樣品，采用特定的檢測試劑及檢測方法，高效、靈敏的檢測到了非洲豬瘟病毒IgA的含量。對非洲豬瘟的抗體檢測提供了新的手段。

據此，我們提出本發明。