[發明專利]一種用于光熱-免疫聯合治療的抗腫瘤自愈合水凝膠的制備方法在審

申請號：	202110312008.1	申請日：	2021-03-24
公開（公告）號：	CN112972680A	公開（公告）日：	2021-06-18
發明（設計）人：	高宇;王波;汪聯輝;楊文靜;肖華新	申請（專利權）人：	南京郵電大學
主分類號：	A61K41/00	分類號：	A61K41/00;A61K39/39;A61K47/32;A61K9/06;A61K49/00;A61P35/00;C01G39/06;B82Y40/00;C12Q1/02;G01N33/15
代理公司：	南京蘇科專利代理有限責任公司 32102	代理人：	牛莉莉;周湛湛
地址：	210012 江蘇***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種用于光熱免疫聯合治療腫瘤自愈合水凝膠制備方法
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【權利要求書】：

1.一種用于光熱-免疫聯合治療的抗腫瘤自愈合水凝膠的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟（1）、首先配制不同濃度的R837溶液，利用紫外分光光度計，測得不同濃度的R837溶液在波峰處的吸收強度，由此作出R837在波峰處吸收強度隨濃度的變化曲線；

步驟（2）、制備MoS₂納米片，其方法為：

在Schlenk 管中裝入MoS₂粉末，將管密封后抽真空，再通入高純Ar氣體以確保管中沒有O₂存在；抽取正丁基鋰溶液，滴加入管中，之后將Schlenk管密封，放入超聲清洗儀中超聲；超聲后靜置分層，將上層的液體取出，在無氧無水的情況下，向管中加入除氧的超純水10 mL，并在超聲的條件下通過水與鋰反應產生的氫氣使MoS₂的片層相互剝離開來，獲得懸濁液狀的產物；將所得產物移入離心管中，加入等體積的無水乙醇，混合均勻后離心，去除上層清液，保留沉淀物，再通過無水乙醇清洗、離心；最后通過加入超純水進行清洗并離心，得到的黑色沉淀用超純水進行分散，即可得到MoS₂納米片溶液；

步驟（3）、對MoS₂納米片進行表面功能化：將DTT溶解于MoS₂納米片溶液中，通入氮氣進行除氧以防止在反應過程中DTT的硫醇基團被氧化，混合溶液在室溫下持續攪拌24h；攪拌24h后，通過透析的方法除去過量的DTT，從而得到DTT修飾的MoS₂納米片；

步驟（4）、首先稱量PVA固體顆粒，加入到10mL的小燒瓶內，再加入MoS₂溶液以及R837溶液，并攪拌均勻；將燒瓶置于油浴鍋中加熱，每隔2-3分鐘攪拌使其混合均勻并形成溶膠；油浴結束后，將溶膠取出并置于注射器內，通過注射器將溶膠均勻地擠入模具內，擠入過程中應保證內部沒有氣泡，將模具放入-20°C冰箱內，一定時間后將冷凍固化的凝膠取出，密封儲存；

步驟（5）、將R837+MoS₂@PVA自愈合水凝膠置于5 mL離心管內并加入超純水，在近紅外光下照射，通過調節不同的光功率來實時監測不同功率下的光熱效應，用熱成像攝像機記錄下溫度隨時間的變化；

步驟（6）、將不同藥物含量的自愈合水凝膠置于孔板中，加入磷酸緩沖溶液，不同時間點取出溶液，測量溶液的吸收強度，定量溶液中的藥物濃度；隨后原孔中補充磷酸緩沖溶液，繼續孵育；統計不同時間的藥物釋放量，繪制累積藥物釋放曲線；

步驟（7）、體外培養癌細胞，將其種在R837+MoS₂@PVA自愈合水凝膠上，MTT 法測量癌細胞的存活率隨時間的變化，測量時每兩天換一次新鮮的培養液；

步驟（8）從小鼠中提取樹突狀細胞（DC），利用24孔板Transwell進行DC成熟實驗，流式檢測DC細胞的成熟度；

步驟（9）構建小鼠腫瘤術后切除模型，局部植入該自愈合水凝膠，隨后通過小動物生物發光成像監測腫瘤復發情況。

2.根據權利要求書1所述的用于光熱-免疫聯合治療的抗腫瘤自愈合水凝膠的制備方法，其特征在于：

所述步驟（1）中，R837溶液濃度范圍為0.001~100μg/mL；

所述步驟（1）中，R837的波峰處于320nm。

3.根據權利要求書1所述的用于光熱-免疫聯合治療的抗腫瘤自愈合水凝膠的制備方法，其特征在于：

所述步驟（2）中，MoS₂粉末的質量為0.2g、正丁基鋰溶液的體積為1mL；

所述步驟（2）中，Schlenk管放入超聲清洗儀中的超聲時間為1h；

所述步驟（2）中，清洗產物的離心條件時間為5min，轉速為12000rpm。