[發(fā)明專利]一種青刺尖莖葉黃酮提取物的定性分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110309957.4
• 申請(qǐng)日: 2021-03-23
• 公開（公告）號(hào): CN113063869B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曲麗萍;周琪;王飛飛;馬驍;高紹陽;郭振宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南貝泰妮生物科技集團(tuán)股份有限公司;上海貝泰妮生物科技有限公司;上海際研生物醫(yī)藥開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/86;G01N30/88;G01N21/33
• 代理公司: 上海兆豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(有限合伙) 31241
• 代理人: 盧艷民

1.一種青刺尖莖葉黃酮提取物的定性分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1,樣品前處理：稱量青刺尖莖葉黃酮提取物取1g，置于錐形瓶中，用20ml體積濃度70％乙醇水溶液超聲溶解，放冷再稱量，用體積濃度70％乙醇水溶液補(bǔ)足減失的重量，取上清液過濾，即得青刺尖莖葉黃酮提取物待測(cè)樣品；

S2,定性分析色譜條件：色譜柱為Agilent poroshell 120 SB-C18；流動(dòng)相為0.1％甲酸-乙腈梯度洗脫：10％乙腈→10％乙腈0～5min，10％乙腈→30％乙腈5～15min，30％乙腈→80％乙腈15～25min，80％乙腈→80％乙腈25～35min；流速：0.4mL·min^-1；柱溫30℃；進(jìn)樣量：2μl；

S3,定性分析質(zhì)譜條件：電噴霧負(fù)離子掃描ESI-，離子源溫度為320℃，毛細(xì)管電壓150V，錐孔電壓65V，脫溶劑氣為10L·min^-1，脫溶劑氣溫度為350℃，霧化氣為8L·min^-1；采用MS^E采集方式，掃描范圍100～3000amu，MS^E高能級(jí)碰撞能量為30Ev，碰撞氣為氮?dú)猓?/p>

S4,定性分析結(jié)果：將青刺尖莖葉黃酮提取物待測(cè)樣品，采用步驟S2和S3的定性分析條件進(jìn)行檢測(cè)，得到青刺尖莖葉黃酮提取物的總離子流圖及254nm下的色譜圖，將檢測(cè)結(jié)果與文獻(xiàn)及數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì),對(duì)各色譜峰進(jìn)行初步推測(cè)；篩選信噪比較好的二級(jí)質(zhì)譜圖以獲取色譜峰的二級(jí)質(zhì)譜信息，并獲得化合物相應(yīng)的碎片離子，根據(jù)離子的裂解情況及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步比對(duì)并推測(cè)化學(xué)成分，最終從青刺尖莖葉黃酮提取物中鑒定出9個(gè)黃酮類化合物，分別為槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-葡萄糖苷、3,6-二葡萄糖基芹菜素、夏佛塔苷、刺槐素、香蒲新苷、蘆丁、金絲桃苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷和異鼠李素-7-O-蕓香糖苷。

2.如權(quán)利要求1所述的一種青刺尖莖葉黃酮提取物的定性分析方法，其特征在于，所述青刺尖莖葉黃酮提取物的制備工藝如下：

S1,青刺尖莖葉提取步驟：將青刺尖莖葉用體積濃度50～80％的乙醇水溶液，回流提取1～3次，合并提取液，過濾并濃縮后即得粗提液；每次提取時(shí)，所述青刺尖莖葉和乙醇水溶液的料液比為1:8-1:15kg/L；

S2,減壓濃縮步驟：將步驟S1制得的粗提液在50～70℃進(jìn)行減壓濃縮，除去粗提液中的乙醇得到濃縮液，濃縮液凍干后得到粗提物粉末；

S3,分離純化步驟：將粗提物粉末加水溶解上樣，過大孔吸附樹脂，所述大孔吸附樹脂的型號(hào)為X-5、AB-8、DM-130、D101、HPD-400或HPD-600，依次用水和體積濃度為20％～40％的乙醇水溶液除雜，然后用體積濃度為50％～80％的乙醇水溶液富集，收集50％～80％的乙醇洗脫液，濃縮干燥得到黃色粉末狀的青刺尖莖葉黃酮提取物。

3.如權(quán)利要求2所述的一種青刺尖莖葉黃酮提取物的定性分析方法，其特征在于，所述青刺尖莖葉提取步驟中，青刺尖莖葉用體積濃度為75％的乙醇水溶液加熱回流提取，加熱溫度為80～100℃。

4.如權(quán)利要求2所述的一種青刺尖莖葉黃酮提取物的定性分析方法，其特征在于，所述分離純化步驟中，水的洗脫體積為5～10BV，體積濃度為20％～40％的乙醇水溶液除雜時(shí)的洗脫體積為3～8BV，50％～80％的乙醇水溶液富集時(shí)的洗脫體積為為6～10BV。