[發明專利]一種基于耐輻射奇球菌的抗氧化保護劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202110301842.0
• 申請日: 2021-03-22
• 公開（公告）號: CN113025525A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 邵明威;趙燁;華躍進
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/06;C12N1/04;A61K8/99;A61Q19/08;A23L33/135;C12R1/01
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 萬尾甜;韓介梅

本發明公開了一種基于耐輻射奇球菌的抗氧化保護劑及其制備方法，是將凍存的耐輻射奇球菌轉接到新鮮滅菌的TGY液體培養基中，培養活化后再轉接到新鮮滅菌的TGY液體培養基中，培養至OD₆₀₀為1.0，收獲細菌后，用1×PBS洗滌，超聲破碎細胞，再在4℃下離心，收取上清液即獲得抗氧化保護劑。所制得的抗氧化保護劑具有優異的總抗氧化能力，經驗證其對大腸桿菌(trans5α)具有優異的抗氧化保護作用，本發明制得的抗氧化保護劑還可用于制備保健品或化妝品。

技術領域

本發明屬于微生物培養技術領域，涉及一種利用微生物代謝產物制備抗氧化保護劑的方法，具體涉及一種基于耐輻射奇球菌的抗氧化保護劑及其制備方法。

背景技術

耐輻射奇球菌是一種極端微生物，由于其超強的環境耐受性而被譽為“地球上最頑強的細菌”。耐輻射奇球菌對氧化、干旱、輻射等具有極強的抵抗能力，存在于沙漠、溫泉、嚴寒等環境中(Chen Y,Xue D,Sun W,et al.sRNA OsiA stabilizes catalase mRNAduring oxidative stress response of Deincoccus radiodurans R1[J].Microorganisms,2019,7(10):422.)。由于其獨特的環境適應能力，耐輻射奇球菌已經成為科學家研究各種非生物逆境脅迫的重要模式生物之一。

細胞的氧化損傷主要是由于細胞內的活性氧(ROS)造成的，目前氧化損傷的類型主要包括蛋白質損傷、核酸損傷和脂質的過氧化。氧化損傷會使細胞中的DNA與蛋白質的結果與功能發生破壞，而這些已經喪失功能的生物大分子在細胞中將成為潛在的有毒物質，可以干擾甚至破壞細胞正常的代謝，從而最終導致細胞的死亡。

科學研究表明，癌癥、衰老或其它疾病大都與過量自由基(ROS)的產生有關聯。研究抗氧化可以有效克服其所帶來的危害，所以抗氧化被保健品、化妝品企業列為主要的研發方向之一，也是市場最重要的功能性訴求之一。微生物的代謝產物相較于普通化學合成的抗氧化物質而言，更加安全、毒害刺激更小，更容易受到消費者的青睞。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于耐輻射奇球菌的抗氧化保護劑及其制備方法，本發明通過將耐輻射奇球菌進行發酵培養從而獲得抗氧化的生物制劑，為相應保健品、化妝品或者科學研究提供一種天然微生物抗氧化劑。

本發明利用耐輻射奇球菌野生型R1菌株(ATCC13939)發酵培養及破碎提純工藝獲得在4℃低溫下可以長期穩定保存的抗氧化保護劑。

所述抗氧化保護劑的制備方法為：

將凍存的耐輻射奇球菌轉接到新鮮滅菌的TGY液體培養基中，30℃過夜培養活化，將活化完成的耐輻射奇球菌再轉接到新鮮滅菌的TGY液體培養基中，30℃過夜培養至OD₆₀₀為1.0。在4℃，8000rpm條件下離心收獲細菌，用1×PBS洗滌后，超聲破碎細胞，再在4℃，8000rpm條件下離心，收取上清液即獲得抗氧化保護劑。

所述的TGY液體培養基中按質量分數計含有0.5％蛋白胨，0.5％酵母提取物，0.1％葡萄糖。

所述的凍存的耐輻射奇球菌，其凍存的方法為：將耐輻射奇球菌菌液與70％甘油在凍存管內按體積比進行1:1混勻，再將凍存管放入-70℃環境保存；所述的70％甘油需預先在高壓滅菌鍋內進行滅菌處理，所述混勻操作需在耐輻射奇球菌專屬無菌操作臺內進行。

通過實施本發明的具體內容，可以達到以下有益效果：

采用本發明的方法可以簡單有效的從耐輻射奇球菌野生型R1菌株(ATCC13939)中制備得到抗氧化保護劑；采用ABTS法測得抗氧化保護劑的總抗氧化能力較強，且驗證了所得抗氧化保護劑對大腸桿菌(trans5α)的氧化保護作用，此外，本發明制得的抗氧化保護劑還可用于制備保健品或化妝品。

附圖說明