[發(fā)明專利]一種基于行為和生化指標(biāo)的抗阿爾茲海默癥藥物的篩選方法及用該方法篩選的藥物

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110295180.0
• 申請(qǐng)日: 2021-03-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112870384A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 靳夢(mèng);劉可春;商學(xué)良;任擎宇;王利振;盛文龍;王榮春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省科學(xué)院生物研究所
• 主分類號(hào): A61K49/00
• 分類號(hào): A61K49/00;A61K36/28;A61P25/28
• 代理公司: 山東濟(jì)南齊魯科技專利事務(wù)所有限公司 37108
• 代理人: 張娟;楊彪

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于行為和生化指標(biāo)的抗阿爾茲海默癥藥物的篩選方法及用該方法篩選的藥物，篩選方法包括：構(gòu)建斑馬魚(yú)幼魚(yú)阿爾茲海默癥模型，確定待篩選藥物的最大安全濃度，對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)處理，利用行為學(xué)和生化指標(biāo)篩選抗阿爾茲海默癥藥物，判斷藥物是否具有抗阿爾茲海默癥，本發(fā)明的基于行為和生化指標(biāo)的抗阿爾茲海默癥藥物的篩選方法，可以系統(tǒng)完整的篩選抗阿爾茲海默癥藥物，尤其是對(duì)效力無(wú)法確定的新藥物進(jìn)行篩選；藥物浸泡和測(cè)試環(huán)境更加簡(jiǎn)單，只需在實(shí)驗(yàn)孔板中進(jìn)行，藥物浸泡時(shí)一個(gè)孔中可藥物浸泡多條魚(yú)，測(cè)試時(shí)最多可以同時(shí)測(cè)試48條魚(yú)的行為能力，操作過(guò)程簡(jiǎn)單，容易操作，大大減輕了測(cè)試的工作量，并且減少了測(cè)試的系統(tǒng)誤差。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物篩選技術(shù)領(lǐng)域，具體說(shuō)是一種基于行為和生化指標(biāo)的抗阿爾茲海默癥藥物的篩選方法及用該方法篩選的藥物。

背景技術(shù)

阿爾茲海默癥是一種最常見(jiàn)的困擾中老年人的神經(jīng)退行性疾病，記憶和認(rèn)知功能障礙是該病的核心特征，臨床表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶和空間辨識(shí)能力下降、對(duì)應(yīng)激刺激恢復(fù)能力下降、反應(yīng)遲鈍，甚至?xí)l(fā)生人格改變進(jìn)展為全面性癡呆狀態(tài)。阿爾茲海默癥主要的神經(jīng)病理學(xué)特征為過(guò)度磷酸化的tau蛋白聚集導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)；β淀粉樣蛋白異常堆積形成細(xì)胞外淀粉樣蛋白斑；由于腦區(qū)異常蛋白的過(guò)量聚集，對(duì)腦部細(xì)胞產(chǎn)生影響甚至凋亡，形成阿爾茲海默癥患者典型的神經(jīng)病理學(xué)損害。另一方面，由于阿爾茲海默癥作為神經(jīng)退行性疾病，因此對(duì)神經(jīng)保護(hù)方面起到作用的藥物都有可能改善阿爾茲海默癥，但是目前還沒(méi)有系統(tǒng)全面的抗阿爾茲海默癥藥物的篩選方法，因此藥物的有效性不能得到驗(yàn)證，嚴(yán)重影響了藥物研發(fā)后效果的驗(yàn)證。

斑馬魚(yú)由于和人類基因同源性高，各組織器官在受精后24小時(shí)即可形成，發(fā)育周期短，個(gè)體小等優(yōu)勢(shì)可以作為篩選阿爾茲海默癥藥物的動(dòng)物模型，中國(guó)專利201811135578.2一種用于藥物篩選的阿爾茲海默癥模型的構(gòu)建方法，以斑馬魚(yú)作為模式動(dòng)物，通過(guò)鋅離子誘導(dǎo)得到阿爾茲海默癥模型；但是該技術(shù)存在以下問(wèn)題：

第一，該技術(shù)沒(méi)有記載如何對(duì)待篩選藥物(效力未定的藥物)進(jìn)行系統(tǒng)完整的篩選；

第二，隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)鋅離子具有一定的腐蝕性，尤其對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的皮膚黏膜具有腐蝕性，因此用鋅離子作為造模藥在測(cè)定阿爾茲海默癥的行為學(xué)檢測(cè)時(shí)，得到的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度和可靠性會(huì)受到影響；

第三，該技術(shù)中是用成年斑馬魚(yú)作為模式動(dòng)物，體積長(zhǎng)度一般是5cm左右，需要在魚(yú)缸中喂養(yǎng)，飼養(yǎng)密度小，并且在測(cè)試時(shí)需要將每條魚(yú)放在測(cè)試缸中單獨(dú)進(jìn)行測(cè)試，一次只能測(cè)試一條魚(yú)，無(wú)法批量進(jìn)行測(cè)試，并且成魚(yú)用藥量多，活動(dòng)力量大，在測(cè)試過(guò)程中不易控制，因此測(cè)試過(guò)程操作繁瑣，工作量龐大，對(duì)魚(yú)缸和測(cè)試缸等飼養(yǎng)和測(cè)試環(huán)境也有較高的要求。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)在阿爾茲海默癥藥物篩選的片面、角度單一、零散并且測(cè)試過(guò)程繁瑣、工作量大，不能批量測(cè)試的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種基于行為和生化指標(biāo)的抗阿爾茲海默癥藥物的篩選方法及用該方法篩選的藥物，能夠?qū)拱柶澓ＤY藥物進(jìn)行全面、高效率、準(zhǔn)確的篩選。

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種基于行為和生化指標(biāo)的抗阿爾茲海默癥藥物的篩選方法，包括以下步驟：

⑴構(gòu)建斑馬魚(yú)幼魚(yú)阿爾茲海默癥模型

以3日齡的斑馬魚(yú)幼魚(yú)作為模式動(dòng)物，通過(guò)80μM濃度的AlCl₃溶液誘導(dǎo)，建立斑馬魚(yú)幼魚(yú)阿爾茲海默癥模型；

⑵確定待篩選藥物對(duì)3日齡斑馬魚(yú)幼魚(yú)的最大安全濃度

⑶對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)處理