[發明專利]一種快速檢測環境中新冠病毒的引物、方法和應用

在審

• 申請號: 202110287813.3
• 申請日: 2021-03-17
• 公開（公告）號: CN112899405A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 焦哲;葉領云;張妮;朱丹;周思杏
• 申請（專利權）人: 東莞理工學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

本發明公開了一種快速檢測環境中新冠病毒的引物、方法和應用。所述檢測方法是基于PCR和DNA熒光染料進行檢測，結果可靠。本發明通過結合便攜光譜儀、便攜PCR儀、移動電源以及智能手機等現有設備，實現了新冠病毒的現場快速檢測，突破了現有檢測技術對人員和場所的限制，且設備便攜，操作簡單。

技術領域

本發明屬于生物技術領域。更具體地，涉及一種一種快速檢測環境中新冠病 毒的引物、方法和應用。

背景技術

為防范新冠病毒，除需對人進行核酸檢測外，對有可能受到新冠病毒污染的 物品、環境等，也有必要開展相應的檢測。

當前，世界衛生組織及國家推薦的新冠病毒檢測方法主要是熒光定量PCR 和基因測序，由于基因測序的速度比較慢，價格也較昂貴，適合從事研究但不適 合作為篩查手段。目前上市的即時檢測(POCT)試劑盒多是基于基因擴增進行 檢測的，和實驗室內的傳統PCR檢測相比，一體化現場快速檢測雖然便攜、操 作簡單，但如果過于強調其“快速”的特性，其靈敏度可能會受影響。此外，基于 試紙條的抗原快速檢測試劑和抗體快速檢測試劑都屬于免疫檢測，免疫檢測比核 酸檢測要快，通常只需15-30分鐘即可出結果，但其靈敏度不如核酸檢測。

目前平衡的最好的仍是核酸檢測試劑盒。從過往的重大疫情來看，無論是西 非埃博拉病毒、甲流還是中東呼吸綜合征(MERS)，實時熒光PCR仍是國家首 推的檢測方式。但實時熒光PCR的議價高，不適合偏遠地區或社區部門進行初 篩。因此，開發新型冠狀病毒的現場快速檢測方法，突破現有檢測技術對人員/ 場所的限制，縮短檢測用時，提升便捷程度，推動診斷前移下移，實現環境樣品 的快速診斷和密切接觸人群的現場篩查是控制疫情的當務之急。

中國專利CN 111560472A公開了一種用于檢測新冠病毒SARS-CoV-2的探 針和引物、試劑盒、檢測方法及應用，其開發了一種全程閉管RNA指數擴增法 (WEPEAR法)，結合逆轉錄-重組酶聚合酶擴增技術(RT-ERA)進行，但其完 成檢測所需儀器較多，無法進行現場可視化快速檢測。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有上述技術的缺陷和不足，提供一種快速 檢測環境中新冠病毒的方法及其應用。

本發明第一個目的是提供一種新冠病毒檢測引物。

本發明第二個目的是提供一種新冠病毒檢測方法。

本發明第三個目的是提供一種快速檢測環境中新冠病毒的產品。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

本發明首先提供了一種新冠病毒檢測引物，包括上游引物和下游引物，其序 列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示。

本發明還提供了所述引物在快速檢測環境中新冠病毒或在制備新冠病毒快 速檢測產品中的應用。

一種快速檢測環境中新冠病毒的方法，其包含以下步驟：

S1.對環境中的待測物表面進行采樣；

S2.提取病毒RNA并進行反轉錄得cDNA；

S3.以步驟S2所得cDNA為模板，用權利要求1所述引物進行PCR擴增；

S4.在步驟S3所得產物中加入聚集誘導發光材料，并在紫外燈下觀察是否出 現熒光。

優選地，所述聚集誘導發光材料為TTAPE。

TTAPE為1,1,2,2-四[4-(2-三乙基氨甲氧基)苯基]乙烯四溴化物，其結構式 如式(I)所示：

優選地，步驟S3中，PCR的擴增體系為：2X Master Mix 12.5μL，上下游 引物各0.2μL，DNA模板1μL，加無菌水補充至25μL。