[發明專利]一種用于體外毒性測試的加熱卷煙全煙氣的提取方法

在審

• 申請號: 202110277272.6
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN113029710A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 華辰鳳;李翔;趙俊偉;尚平平;謝復煒;孫學輝;秦亞瓊;劉惠民
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: G01N1/24
• 分類號: G01N1/24;G01N1/34;G01N1/28;G01N1/38;G01N1/42
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 李寧

本發明涉及一種用于體外毒性測試的加熱卷煙全煙氣的提取方法，屬于煙氣毒性分析技術領域。本發明的提取方法包括以下步驟：1)抽吸加熱卷煙時采用濾片捕集煙氣總粒相物，采用DPBS緩沖液吸收穿過濾片的煙氣氣相物；每個濾片對應的抽吸口數為35?45口且對應采用的緩沖液體積為V₁，V₁為2?3.75mL；2)采用DMSO對捕集的煙氣總粒相物進行萃取，將萃取液與吸收后的緩沖溶液混合；每個濾片對應采用的DMSO體積為V₂，V₂為2?3.0mL且V₂≤V₁。該方法能夠充分獲取加熱卷煙煙氣提取物，并獲得較高濃度的全煙氣提取物母液，用于體外毒性測試時可以獲得較大細胞毒性響應范圍，從而較好的評估加熱卷煙的體外毒性情況。

技術領域

本發明涉及一種用于體外毒性測試的加熱卷煙全煙氣的提取方法，屬于煙氣毒性分析技術領域。

背景技術

加熱卷煙(又被稱為加熱不燃燒卷煙、電加熱卷煙或加熱煙草制品)是一類為降低煙氣健康風險研發的新型煙草制品。該類產品主要通過控制溫度使煙葉在非燃燒狀態下釋放煙氣供消費者使用。由于其具有低危害和類似于可燃卷煙的口感、尼古丁輸送等特性，日漸受到消費者青睞。研究發現，加熱卷煙的“低危害”可能是由于其加熱溫度(不超過350℃)比傳統卷煙燃燒溫度低，釋放出比燃燒卷煙較低的有害和潛在有害成分引起的。

卷煙煙氣由粒相成分和氣相成分組成。卷煙體外毒性測試全煙氣提取方法：濾片收集的煙氣總粒相物(TPM)用一定體積的二甲基亞砜(DMSO)萃取并定容至10mg/mL濃度的TPM的DMSO溶液，用等DMSO體積的緩沖液收集煙氣氣相物(GVP)，然后將TPM和GVP溶液等體積混合用于后續細胞毒性測試。在確定毒性測試劑量范圍時，由于DMSO超過一定體積分數后對細胞有毒性損傷，因此，允許的最大染毒劑量通常控制在DMSO體積分數為2％以下，例如：根據這一方式，參比卷煙3R4F最大允許的染毒劑量約為388.2μg/mL，實際上，在染毒劑量約為80μg/mL下，Beas-2b細胞存活率即可達到30％左右，因此，在這種提取方法下，很容易觀察到最大的Beas-2b細胞毒性響應范圍，并且做到50％細胞存活率的響應濃度。

當前用于加熱卷煙體外毒性測試的全煙氣提取方法主要延用傳統卷煙的全煙氣提取方法，但是由于加熱卷煙煙氣有害成分較少，毒性小，在傳統卷煙的全煙氣提取方案下，容易造成提取母液中全煙氣提取物濃度低而DMSO濃度較高，從而，無法觀察到較低細胞存活率的細胞毒性響應范圍，從而無法客觀地評估加熱卷煙的體外毒性情況。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于體外毒性測試的加熱卷煙全煙氣的提取方法，可以獲得較大的細胞毒性響應范圍。

為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是：

一種用于體外毒性測試的加熱卷煙全煙氣的提取方法，包括以下步驟：

1)在抽吸加熱卷煙的過程中，采用濾片捕集煙氣總粒相物，采用DPBS緩沖液吸收穿過濾片的煙氣氣相物；每1個濾片對應的抽吸口數為35-45口，且每使用1個濾片對應采用的DPBS緩沖液的體積為V₁，V₁為2-3.75mL；所述濾片為購自Borgwaldt KC GmbH的規格為直徑44mm的劍橋濾片；

2)捕集結束后，采用二甲基亞砜對濾片上捕集的煙氣總粒相物進行萃取，萃取有煙氣總粒相物的二甲基亞砜與步驟1)中吸收煙氣氣相物后的DPBS緩沖溶液進行混合；進行所述萃取時，每1個濾片對應采用的二甲基亞砜的體積為V₂，V₂為2-3.0mL且V₂≤V₁。