[發明專利]一種研究CXCR3介導的TLRs/MyD88信號通路在促進乙肝肝硬化癌變的方法

在審

• 申請號: 202110276969.1
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN113073119A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 袁剛;曾傳莉;朱德東;汪東輝;石小軍;胡愛榮;胡耀仁
• 申請（專利權）人: 中國科學院大學寧波華美醫院
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/51;C12N15/113;C12N15/12
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 杜放

本發明提供一種研究CXCR3介導的TLRs/MyD88信號通路在促進乙肝肝硬化癌變的方法，步驟三：從感染了慢病毒的LX?2細胞中提取出RNA和蛋白質，以進行PCR驗證和WB驗證；步驟四：用CXCR3干擾劑轉染HBV慢病毒感染的LX?2細胞，并從CXCR3干擾劑轉染的LX?2細胞中提取出RNA和蛋白質，以進行qPCR驗證和WB驗證。本發明通過體外培養過表達HBV的肝星狀細胞株HBV?LX?2，同時瞬時干擾CXCR3的表達，來探究CXCR3是否參與調控TLRs/MyD88信號通路上基因的表達，是否對肝星狀細胞增殖、遷移和凋亡是否有影響，從而來推斷CXCR3和TLRs/MyD88信號通路在肝硬化癌變中的作用。研究發現干擾CXCR3可以下調TLRs/MyD88信號通路上的基因表達，抑制HBV?LX?2的生理活動。

技術領域

本發明屬于醫療技術領域，尤其是涉及一種CXCR3介導的TLRs/MyD88信號通路在促進乙肝肝硬化癌變的方法。

背景技術

根據世界衛生組織統計，2015年，全球估計有2.57億人患慢性乙型肝炎，慢性乙型肝炎病毒(HBV，HepatitisBvirus)的感染會導致肝硬化和肝癌[1,2,3]，全球約有134萬人死于肝病，其中患肝硬化死亡的有74萬人^[3]。HBV主要引起慢性肝病，可以在患者體內持續幾十年的慢性感染，導致肝臟炎癥病變。HBV 并非直接導致肝細胞病變，而是通過宿主的免疫和炎癥反應來導致肝炎和肝癌的發生。肝癌發展的過程中，趨化因子及其受體扮演著重要的角色，趨化因子受體 CXCR3，屬于趨化因子受體的CXC亞家族^[4]，在結腸癌，黑素瘤，B淋巴瘤和乳腺癌等癌細胞中高表達。它與配體趨化因子CXCL9的特異性結合后促進癌細胞遷移和侵襲^[5]。CXCR3可以增強磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和下游Akt的活性，進而來調節細胞的增殖、凋亡和遷移等活動^[6]，CXCR3可以在多種細胞中表達，如Th1T細胞，CD8 T細胞，NKT細胞，NK細胞，樹突狀細胞和某些癌細胞^[7-9]，CXCR3在干擾素誘導后迅速上調，并促進T細胞，如CD4+T和CD8+T 細胞遷移至炎癥組織^[10,11]。CXCR3在T細胞上的表達調節其抗腫瘤反應，而在腫瘤細胞上的表達促進癌癥轉移的反應^[12,13]。天然免疫和適應性免疫在乙型肝炎病毒急、慢性感染及其致病中起著重要的作用。Toll樣受體 (Toll-likereceptors,TLRs)是天然免疫識別受體中的一種，可以通過識別細菌和真菌的細胞壁成分來抵制微生物感染，并產生相應的免疫應答反應^[14-16]，髓樣分化因子88(myeloiddifferentiationprimary-responseprotein88,MyD88)是除了TLR3， TLRs共用的銜接蛋白，MyD88中含有TIR結構域的銜接蛋白 (TIRdomain-containingadaptorprotein,TIRAP)，TLR4能夠激活TIRAP/MyD88信號傳導途徑，通過NF-κB和激活蛋白1(AP1)，激活促炎細胞因子IL-6，IL-10， IL-12和TNF-α的產生^[17,18]，這種TLR促進炎癥因子的反應同樣在肝細胞中存在，并且IL-6和TNF-α對肝細胞中HBV的復制有抑制作用^[19,20]。在MyD88信號傳導途徑中，HBV作為一種異物被識別^[21-22]。胞質中的嗜中性白細胞堿性磷酸酶3(neutrophilicalkalinephosphatase3,NALP3)復合體被激活，并促進炎性因子IL-1β分泌，IL-1β的異常分泌能夠使機體產生或者加重炎癥反應。成熟的IL-1 β與細胞上IL-1β受體結合，并促使接頭蛋白分子MyD88的再次激活^[23-24]。趨化因子受體CXCR3和TLRs/MyD88信號通路在誘導乙型肝炎向癌癥發展中有著重要的作用，在以往的研究中，主要是研究CXCR3或TLRs等各自在癌癥中的作用，而兩者之間的調控關系對于肝癌的發展研究較少。

發明內容