[發明專利]一種普適性可注射微波增敏免疫凝膠的制備方法

在審

• 申請號: 202110274020.8
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN113018428A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 孫少凱;經翔;潘金彬;操雨婷;周燕
• 申請（專利權）人: 天津醫科大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K9/06;A61K47/36;A61P37/04;A61P35/00;A61B18/18
• 代理公司: 天津耀達律師事務所 12223
• 代理人: 侯力

一種普適性可注射微波增敏免疫凝膠的制備方法，步驟如下：(1)將海藻酸鈉粉末于水中攪拌溶解得到溶液A；(2)將免疫刺激劑添加到步驟(1)所得的溶液A中繼續室溫下攪拌得到溶液B；(3)向步驟(2)所得的溶液B中緩慢滴加CaCl₂水溶液，邊滴加邊攪拌，即可獲得均勻穩定的免疫凝膠；(4)最終將產品置于4℃保存。該免疫凝膠制備方法步驟簡單、條件溫和、即混即用，便于大規模商品化生產。所得凝膠具有良好的生物安全性、可注射性、微波增敏能力及顯著的免疫激活能力，可用于普適性微波消融?免疫聯合抗腫瘤治療，具有良好的應用價值及臨床轉化前景。

技術領域

本發明涉及水凝膠的制備和應用領域，特別是兼有微波熱療增敏、免疫激活和高效抗腫瘤治療效果的免疫凝膠的制備方法。

背景技術

經皮微波消融是一種臨床廣泛使用的局部腫瘤消融治療方法，其主要通過插入腫瘤組織內的微波電極產生電磁場，驅使腫瘤組織內的極性分子不斷摩擦產熱，從而促進腫瘤組織發生凝固性壞死，最終達到消融腫瘤的目的。相比于傳統的外科手術治療，微波消融具有微創、高效、并發癥少等顯著優勢。盡管如此，腫瘤患者微波消融術后依然存在腫瘤進展與復發的風險。研究顯示，腫瘤患者微波消融術后局部和遠處3年復發率分別為10％-13％和27％-59％。因此，如何有效抑制微波消融術后腫瘤復發及轉移成為臨床中亟需解決的難題。

免疫治療是指利用自身免疫系統殺傷腫瘤細胞的一種治療方法，在防止腫瘤復發和遠處轉移方面顯示出巨大的潛力。事實上，在微波消融過程中本身就會釋放大量細胞碎片(含有豐富的腫瘤相關抗原)，同時募集各種炎性細胞，例如樹突狀細胞、自然殺傷細胞、巨噬細胞和T淋巴細胞等。這為機體免疫細胞識別、提呈腫瘤抗原并發揮腫瘤疫苗樣功能提供了一個天然的絕佳機會。然而，由于受限于腫瘤免疫微環境固有的抗原提呈效率低、免疫刺激信號弱以及免疫耐受等特點，微波消融誘導的抗腫瘤免疫應答還遠不足以高效預防腫瘤復發和遠處轉移。因此，將免疫治療與微波消融聯合有望解決臨床工作中微波消融術后局部腫瘤復發及遠處轉移的棘手問題，從而改善患者預后。

目前，各種局部和系統性免疫治療策略被應用于微波消融后的聯合抗腫瘤治療，例如免疫檢查點封鎖療法、細胞因子療法、免疫細胞療法、疫苗療法以及免疫佐劑療法。然而，目前這些免疫治療策略各自都面臨著一些挑戰，例如需要精心設計包封載體、復雜的細胞工程、令人擔憂的生物安全性以及難以令人滿意的普適性。以目前最熱門的免疫檢查點封鎖療法為例，通過靶向CTLA-4、PD-1以及PD-L1等細胞表面分子，該療法已經在多種腫瘤(如非小細胞肺癌、惡性黑色素瘤等)的治療上取得了令人矚目的臨床治療效果。盡管如此，免疫檢查點封鎖療法依然存在難以避免的缺陷，比如僅對部分患者或者腫瘤類型有效、嚴重的系統性副作用、冗雜的基因篩查過程，因此僅有少部分患者適用于該療法。最近，以腫瘤本身作為抗原來源輔以免疫佐劑的原位腫瘤疫苗療法吸引了越來越多的關注，尤其是在光學-免疫聯合治療以及放療-免疫聯合治療等方面。免疫佐劑是一類特殊的免疫刺激化合物，可通過促進抗原呈遞、放大激活信號、減輕免疫耐受來提高抗腫瘤免疫應答的質量，具有更普遍的適用性。由于每種腫瘤都有一組獨特的腫瘤相關抗原和腫瘤新抗原，免疫佐劑介導的原位疫苗療法可以充分利用微波消融后的所有腫瘤相關抗原，而無需鑒定和選擇特定的疫苗抗原。由此可見，免疫佐劑聯合微波消融不僅可以有效地消除原發腫瘤，而且可以充分利用所有釋放的腫瘤抗原進行原位免疫激活，產生高度特異性的抗腫瘤免疫應答。然而，許多免疫佐劑都是疏水性分子(如FDA批準使用的的咪喹莫特R837等)，需要精心構建載體以增加其生物利用率。因此，發展一種簡單、通用且極具臨床轉化前景的遞送策略用于疏水性免疫佐劑的原位高劑量給藥和長時間滯留是目前微波消融-免疫聯合抗腫瘤治療策略中亟需解決的關鍵問題。

發明內容

本發明的目的是為了解決目前微波熱療-免疫治療過程中存在的復雜細胞工程、需要精心設計包封載體以及適用范圍局限等問題，提供一種普適性可注射微波增敏免疫凝膠的制備方法。