[發明專利]一種自放大精準控制的間接競爭免疫層析試紙條及應用

在審

• 申請號: 202110272753.8
• 申請日: 2021-03-13
• 公開（公告）號: CN113030467A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 孫亞寧;楊蘇珍;郭振華;金前躍;楊繼飛;胡驍飛;鄧瑞廣;張改平
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/53;G01N33/532;G01N33/531
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

本發明涉及一種“自放大”、“精準控制”的間接競爭免疫層析檢測試紙條，由試紙和樣品杯兩部分組成；試紙包括支撐層、固定在支撐層上的吸附層和保護層；吸附層從測試端依次為樣品墊、結合墊、纖維素膜層及手柄端的吸水材料層；纖維素膜層上依次設置有檢測線和質控線；結合墊采用吸附有納米材料標記抗原的玻璃纖維棉制成；樣品杯為稀釋樣品用容器，樣品杯內預固定有靶標物單克隆抗體。該試紙條將抗體獨立干燥于樣品杯中，避免了抗體標記過程中的折疊及損傷，并可精確控制抗體用量；以納米顆粒標記人工抗原作為探針，檢測線上攔截的每個抗體都能精準結合兩個標記抗原，實現了信號自放大，從而提高試紙靈敏度。

技術領域

本發明涉及一種免疫層析檢測方法，具體涉及一種用于半抗原檢測的“自放大”“精準控制”的間接競爭免疫層析檢測試紙條及應用。

背景技術

免疫層析技術是近些年發展起來的一種快速免疫檢測技術，它的基本原理是抗體和抗原之間的相互作用，以硝酸纖維素膜為載體，標記抗原或抗體作為示蹤劑的一種層析檢測技術。與傳統的免疫分析方法相比，免疫層析技術具有特異性強、檢測結果準確、設備操作簡單、測量快速、成本低、不需要熟練的技術人員或昂貴的設備等優點，完全符合即時檢測要求。目前，免疫層析技術已經被廣泛應用在醫藥、畜牧業、農業及食品安全等領域。

在食品安全領域，基于競爭原理的小分子抗原免疫層析技術應用最為廣泛，然而現有檢測模式常會遇到抗原及抗體等免疫試劑可以成功建立ELISA檢測方法，但不能成功建立免疫層析試紙；而且在很多應用中試紙靈敏度仍然需要改進。究其原因主要有以下三個方面：1、抗體在標記過程中出現了折疊，且為了穩定標記材料加入了過量抗體；2、人工抗原攔截抗體效率低，為了提高顯色必須加入過量的標記抗體提高顯色；3、膠體金標記抗體時無信號放大作用，量子點等熒光材料實現信號放大的同時則需要檢測儀器判定結果，讓檢測復雜化。現有的小分子免疫層析檢測模式無法解決這一問題，因此迫切需要一種簡便的、靈敏的試紙檢測模式，為免疫層析試紙的研發提供更好的工具。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種用于半抗原檢測的“自放大”“精準控制”的間接競爭免疫層析檢測試紙條及應用，以膠體金等標記材料標記人工抗原；硝酸纖維素膜上檢測線固定二抗或SPA，選用獨立質控(C)線:不與試紙中任何組份反應的一對可以特異性結合的物質，可以是抗原抗體，也可以是生物素-親和素等，本發明以生物素-親和素為例制備質控線；用金標蛋白重懸液稀釋單克隆抗體并干燥于樣品杯中，該檢測方法與傳統方法相比可以精確的控制抗體用量，并基于金標抗原實現信號放大，使免疫層析試紙的靈敏度更高。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種“自放大”“精準控制”的間接競爭免疫層析檢測試紙條，由試紙和樣品杯兩部分組成；所述試紙包括支撐層、固定在支撐層上的吸附層和保護層；所述吸附層從測試端依次為樣品墊、結合墊、纖維素膜層及手柄端的吸水材料層；所述保護層固定在樣品墊、結合墊及吸水材料層上；纖維素膜層上依次設置有檢測線和質控線；所述結合墊采用吸附有納米材料標記抗原的玻璃纖維棉制成；所述樣品杯為稀釋樣品用容器，樣品杯內預固定有金標蛋白重懸液稀釋的靶標物單克隆抗體。

所述納米材料標記抗原為膠體金、量子點或硅球納米材料標記的人工抗原。

所述人工抗原由小分子半抗原與載體蛋白偶聯制備而成；偶聯人工抗原的載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清白蛋白或鑰孔血藍蛋白。

所述樣品墊用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；吸水材料層用吸水濾紙制成；支撐層用不吸水的韌性材料制成；纖維素膜層用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜制成；所述檢測線和質控線為平行排列的“‖”直線式印跡，或為“十十”字型排列印跡，或為“┬┬”字型排列印跡，或為“┴┴”字型排列印跡，或為“├├”字型排列印跡，或為“┤┤”字型排列印跡。

所述檢測線噴涂有羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或SPA。