[發明專利]一種透明質酸片段的新應用及制造方法

在審

• 申請號: 202110270013.0
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN114848667A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 郭田田;王家麒;李鑫榮;賈瀟瀟;吳書音;惠鑫瑤;桐輝;崔家友;張之輝;叢振昱;王起飛;王鳳舞;宋琳;惠覓宙
• 申請（專利權）人: 青島農業大學;青島惠諾德生物科技有限公司;紹興惠薈科技有限公司
• 主分類號: A61K31/728
• 分類號: A61K31/728;A61P29/00;C12P19/14;C12P19/04
• 代理公司: 北京方韜法業專利代理事務所(普通合伙) 11303
• 代理人: 馬麗蓮

1.一種透明質酸片段的新應用，其特征在于，所述透明質酸片段為：使用重組人透明質酸酶PH20或提取牛透明質酸酶PH20，足量或輕度過量充分酶解高或中分子量透明質酸原料制造而成的、能通過0.22μm孔徑濾膜的、平均分子量為35±8KDa的透明質酸片段；

所述應用為：

所述透明質酸片段作為人單個核細胞移走促進劑的應用；

和/或，所述透明質酸片段通過皮下或靜脈注射作為人淋巴細胞和液體回流和淋巴細胞的免疫調節劑的應用；

和/或，所述透明質酸片段作為人中性粒細胞移走抑制劑的應用。

2.一種透明質酸片段的新應用，其特征在于，所述透明質酸片段為：使用重組人透明質酸酶PH20或提取牛透明質酸酶PH20，足量或輕度過量充分酶解高或中分子量透明質酸原料制造而成的、能通過0.22μm孔徑濾膜的、平均分子量為35±8KDa的透明質酸片段；

所述應用為：

所述透明質酸片段在制備治療人單個核細胞移走相關炎癥性疾病藥物中的應用，或在制備人單個核細胞移走促進劑中的應用；

和/或，所述透明質酸片段在制備通過皮下或靜脈注射的、治療人淋巴細胞和液體回流相關炎癥性疾病藥物中的應用，或在制備通過皮下或靜脈注射的、人淋巴細胞和液體回流和淋巴細胞的免疫調節劑中的應用；

和/或，所述透明質酸片段在制備治療人中性粒細胞移走相關炎癥性疾病藥物中的應用，或在制備治療人中性粒細胞移走抑制劑中的應用。

3.根據權利要求1或2所述的透明質酸片段的新應用，其特征在于，所述人單個核細胞為淋巴細胞；

所述透明質酸片段在150-300μg/mL的濃度下抑制人中性粒細胞移走。

4.一種透明質酸片段的制造方法，其特征在于，使用重組人透明質酸酶PH20或提取牛透明質酸酶PH20，足量或輕度過量充分酶解高或中分子量透明質酸原料制造平均分子量為35±8KDa的透明質酸片段。

5.根據權利要求4所述的透明質酸片段的制造方法，其特征在于，所述片段能通過0.22μm孔徑濾膜；所述酶解時間為2-6小時。

6.根據權利要求4所述的透明質酸片段的制造方法，其特征在于，使用重組人透明質酸酶PH20或提取牛透明質酸酶PH20注射液混合高或中分子量透明質酸注射液，酶解制造平均分子量為35±8KDa的透明質酸片段注射液。

7.根據權利要求4或6所述的透明質酸片段的制造方法，其特征在于，酶解時間為10-20分鐘。

8.根據權利要求1-3任一項所述的新應用，或權利要求4-7任一項所述的制造方法，其特征在于，所述足量或輕度過量充分酶解為：

(1)10-20分鐘足量或輕度過量充分酶解中和高分子透明質酸原料制造的透明質酸片段的分子量和1-6小時足量或輕度過量充分酶解中和高分子透明質酸原料制造的透明質酸片段的分子量基本一致，變異系數CV15％；

(2)99％高或中分子透明質酸原料被足量或輕度過量充分酶解的低分子透明質酸片段產物被0.22um孔徑濾膜全部順利濾過；

(3)透明質酸酶活性經足量或輕度過量充分酶解反應后基本沒有殘留或少量殘留，殘留量15％，80度45分鐘可全部滅活。

9.一種透明質酸片段的制造方法，其特征在于，用于制造分子量大小不一的透明質酸片段，所述方法為：使用不同分子量大小的重組透明質酸酶或提取的透明質酸酶，酶解切割高分子透明質酸原料制造分子量大小不一的透明質酸片段。

10.根據權利要求9所述的透明質酸片段的制造方法，其特征在于，所述不同分子量大小的重組透明質酸酶或提取的透明質酸酶為：多種不同種屬的全長、部分和融合的重組透明質酸酶或提取的透明質酸酶。