[發明專利]一種金針菇金1767菌種及其SSR標記指紋圖譜的鑒定方法和構建方法與應用

在審

• 申請號: 202110269726.5
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN112725522A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 王瑞娟;陸歡;徐珍;劉建雨;尚曉冬;張美彥;章爐軍
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 南京燦爛知識產權代理有限公司 32356
• 代理人: 王江南

本發明公開了一種金針菇金1767菌種及其SSR標記指紋圖譜的鑒定方法和構建方法與應用，包括該指紋圖譜由6對SSR標記組成。構建方法包括：(1)菌絲培養；(2)基因組DNA的提取；(3)SSR分子標記的檢測；(4)毛細管電泳檢測。應用包括：對金針菇菌種進行SSR標記擴增，將得到的帶型與指紋圖譜對照，與該組指紋圖譜一致即為金針菇金1767菌種。本發明與常規形態學檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短、準確性高、可重復性好的優點，在收集的國內外105個金針菇栽培主栽菌種中具有金針菇金1767菌種的專一性。

技術領域

本發明屬于金針菇菌種的檢測技術領域，具體涉及一種金針菇金1767菌種及其SSR標記指紋圖譜的鑒定方法和構建方法與應用。

背景技術

金針菇(Flammulina filiformis)是一種普遍栽培的食用菌，通常分為白色和黃色品種。其栽培歷史悠久，生產總量逐年提升，目前已成為我國工廠化食用菌企業中發展速度最快、規模最大的一個品種。我國工廠化栽培金針菇的日產量約占我國食用菌工廠化總產量的47.12％。金針菇營養豐富、味道鮮美且兼具藥用價值，不僅富含蛋白質、礦物質和維生素等各種營養成分，而且具有抗腫瘤、增強免疫調節、抗病毒、降血脂、抗疲勞和護肝等多種藥用保健作用，深受消費者喜愛。

優質菌種在金針菇單產和質量中的貢獻率舉足輕重。我國的金針菇工廠化栽培菌株以國外選育的首潮產量高、生長周期短和耐儲藏的白色菌株為主導。與國外相比，國內金針菇育種工作相對滯后，也是導致目前國產菌株市場占有率小的原因。但是相對于目前主導的工廠化菌株而言，我國有著豐富的金針菇野生和自然栽培資源，高效利用這些優質的資源，拓展菌株的遺傳基礎，有利于國內高產、優質、特色金針菇菌株的選育。1999年，我國簽署了《國際植物新品種保護法》，這不僅要求我們尊重其它國家的品種知識產權，同時也要加強保護我們國家自己的品種知識產權。為了建立食用菌新品種登記制度來真正保護我國的品種產權，必須首先建立成熟的品種鑒定技術，為新品種登記奠定基礎。就國內而言，金針菇栽培菌種多樣性低導致的產品同質化現象，不僅給生產企業帶來了經濟損失，也極大地影響了中國金針菇產業的快速發展；另一方面，工廠化栽培方式和菌株退化現象對金針菇栽培菌株質量的要求越來越高，需要發展更為簡便、快速、精準的菌株鑒定技術，以保證每批次使用的都是優質、準確的菌種。

針對上述金針菇產業發展現狀，利用現代分子生物學技術開發精準有效的金針菇菌種鑒定體系是一項極為重要的工作。

發明內容

金針菇(Flammulina filiformis)金1767，于2021年1月22日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，廣東省微生物研究所，保藏編號為GDMCC No：61485。

本發明所要解決的技術問題是提供一種金針菇“金1767”菌種的SSR標記指紋圖譜及其構建方法與應用，該指紋圖譜與常規形態學檢測、拮抗試驗、出菇試驗相比，具有檢測時間短，準確性高，重復性好的優點。

本發明的一種金針菇“金1767”菌種的SSR標記指紋圖譜，該指紋圖譜由6對SSR標記組成，是基于金針菇基因組簡單重復序列片段開發SSR引物，擴增帶型好，重復性高的SSR引物，標記詳細信息如表1：

表1 SSR標記詳細信息列表

本發明的一種金針菇“金1767”菌種的SSR標記指紋圖譜的構建方法，包括：

(1)菌絲培養：將金針菇菌種轉接到馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養基(PDA)上，25℃培養7d后收集菌絲；

(2)基因組DNA的提取：用TAKARA公司的TaqHotStart擴增試劑盒提取上述菌絲的基因組DNA，紫外分光光度法檢測總基因組DNA濃度和純度，調整樣品DNA的濃度一致；

(3)SSR分子標記的檢測：對上述提取的DNA進行基因SSR標記的PCR擴增；