[發(fā)明專利]一種可靶向觸發(fā)和自校準(zhǔn)的適配體SERS傳感器高精度檢測(cè)人體血液中腫瘤標(biāo)志物的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110258440.7
• 申請(qǐng)日: 2021-03-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112986211A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林多;馮尚源;吳瓊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/65
• 分類號(hào): G01N21/65
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學(xué)俊

1.一種基可靶向觸發(fā)和自校準(zhǔn)的適配體SERS傳感器高精度檢測(cè)人體血液中腫瘤標(biāo)志物的方法，其特征在于，利用可靶向觸發(fā)和自校準(zhǔn)的適配體SERS傳感器，通過(guò)免疫方法捕獲蛋白腫瘤標(biāo)志物后測(cè)量拉曼標(biāo)記分子的信號(hào)，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤標(biāo)志物的高精度、高特異性SERS檢測(cè)；所述適配體SERS傳感器以46nm的銀包金納米粒子為核，外部衛(wèi)星是20 nm的金納米粒子，形成一種核衛(wèi)星結(jié)構(gòu)的SERS傳感模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是在于，核衛(wèi)星納米組件中間為嵌入內(nèi)標(biāo)分子（4MBN）的核殼納米粒子，這是一種在1800 - 2300 cm^-1（靜默區(qū)）有拉曼信號(hào)的標(biāo)記分子，不會(huì)與生物分子的拉曼信號(hào)重疊，也可消除外部環(huán)境對(duì)SERS信號(hào)的影響，實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)自校準(zhǔn)，提高SERS檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述傳感器的制備方法包括以下步驟：通過(guò)巰基將適配體修飾在核殼納米粒子上，并加入PBS緩沖液調(diào)節(jié)pH值，緩慢攪拌，使其適配體DNA通過(guò)巰基與Au@4MBN@Ag結(jié)合形成Au@4MBN@Ag^@ADNA NPs，用PBS洗滌濃縮后重懸于PBS中；用同樣的方法，將適配體的互補(bǔ)DNA鏈修飾在衛(wèi)星Au納米粒子上，形成Au^@CDNANPs；通過(guò)DNA的堿基互補(bǔ)配對(duì)，將Au@4MBN@Ag^@ADNA NPs與Au^@CDNANPs進(jìn)行連接，形成核殼衛(wèi)星結(jié)構(gòu)的適配體SERS傳感器模型。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，其中適配體為與前列腺抗原特異性結(jié)合的DNA單鏈，適配體的5'端修飾有巰基，使它易與貴金屬納米粒子結(jié)合，并在近5'端接上10個(gè)胸腺嘧啶，使適配體形成直鏈，避免貼于金屬納米粒子表面；根據(jù)適配體序列設(shè)計(jì)出互補(bǔ)的DNA單鏈，所述互補(bǔ)DNA單鏈的3'端上修飾拉曼報(bào)道分子Cy5，通過(guò)范德華力、氫鍵和靜電相互作用形成穩(wěn)定的目標(biāo)-適配體復(fù)合物；

所述與前列腺抗原特異性結(jié)合的DNA單鏈序列為：

SH-(CH₂)₆-TTTTTTTTTTATTAAAGCTCGCCATCAAATAGCTGC；

所述互補(bǔ)的DNA單鏈序列為：

SH-(CH₂)₆-TTTTTTTTTTGCAGCTATTT-Cy5。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，在DNA單鏈修飾納米粒子之前，先將單鏈DNA活化；所述活化包括以下步驟：分別將與腫瘤標(biāo)志物特異性結(jié)合的適配體10^-5 M DNA鏈和帶有拉曼報(bào)道分子的互補(bǔ)DNA鏈放入到5 mM TCEP和Tris-HCl緩沖液的混合溶液中，所述DNA、TCEP和Tris-HCl緩沖液的體積比為1:1:1，活化巰基。