[發明專利]CSF1R基因人源化的非人動物及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 202110255279.8
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN113046390A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 沈月雷;郭朝設;張美玲;黃蕤;白陽;周小飛
• 申請（專利權）人: 百奧賽圖江蘇基因生物技術有限公司;百奧賽圖（北京）醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027;C07K14/715;C12N15/12;C12N5/10;A61K49/00
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 徐丹丹;劉玉玲

1.一種CSF1R基因人源化的非人動物的構建方法，其特征在于，所述的非人動物體內表達人或人源化CSF1R蛋白。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述的人源化CSF1R蛋白包含人CSF1R蛋白的胞外區，優選的，所述的人源化CSF1R蛋白包含SEQ ID NO：4的第20-517位氨基酸序列，進一步優選的，所述的人源化CSF1R蛋白還包含非人動物信號肽、跨膜區和/或胞質區。

3.根據權利要求1或2所述的構建方法，其特征在于，所述的人源化CSF1R蛋白的氨基酸序列包括下列組中的一種：

a)SEQ ID NO：12氨基酸序列；

b)與SEQ ID NO：12氨基酸序列同一性至少為90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

c)與SEQ ID NO：12所示氨基酸序列差異不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超過1個氨基酸；或，

d)與SEQ ID NO：12所示的，包括取代、缺失和/或插入一個或多個氨基酸殘基的氨基酸序列。

4.根據權利要求1-3任一所述的構建方法，其特征在于，所述的非人動物的基因組中包含人CSF1R基因的3號至11號外顯子，優選包含3號外顯子的部分、4號至10號外顯子的全部和11號外顯子的部分，進一步優選包含SEQ ID NO：7或30所示核苷酸序列。

5.根據權利要求1-4任一所述的構建方法，其特征在于，所述的非人動物的基因組中包含人源化CSF1R基因，所述的人源化CSF1R基因編碼人或人源化CSF1R蛋白，優選的，所述的人源化CSF1R基因包含下列組中的一種：

a)轉錄的mRNA序列為SEQ ID NO：11所示核苷酸序列；

b)轉錄的mRNA序列與SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列的同一性至少為90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

c)轉錄的mRNA序列與SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列差異不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超過1個核苷酸；

d)轉錄的mRNA序列與SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列所示的，包括取代、缺失和/或插入一個或多個核苷酸的核苷酸序列；

e)包含SEQ ID NO：8和/或31所示核苷酸序列；

f)包含與SEQ ID NO：8和/或31所示核苷酸序列的同一性至少為90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；

g)包含與SEQ ID NO：8和/或31所示核苷酸序列差異不超過10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超過1個核苷酸；或，

h)包含與SEQ ID NO：8和/或31所示核苷酸序列所示的，包括取代、缺失和/或插入一個或多個核苷酸的核苷酸序列。

6.根據權利要求1-5任一所述的構建方法，其特征在于，包括將人源核苷酸序列可操作的連接在非人動物CSF1R基因座上，獲得CSF1R基因人源化的非人動物，所述的人源核苷酸序列包含下列組中的一種：

a)編碼人或人源化CSF1R蛋白的核苷酸序列；

b)編碼人CSF1R蛋白胞外區的核苷酸序列；

c)人源化CSF1R基因的核苷酸序列；或，

d)人CSF1R基因的3號至11號外顯子，優選包含3號外顯子的部分、4號至10號外顯子的全部和11號外顯子的部分，進一步優選包含SEQ ID NO：7或30所示核苷酸序列。

7.根據權利要求6所述的構建方法，其特征在于，所述的可操作的連接為將人源核苷酸序列替換非人動物相應區域，優選為替換非人動物基因組中編碼內源CSF1R蛋白胞外區的核苷酸序列，進一步優選為替換非人動物與NCBI登錄號為NC_000084.6的第61109624至61118992位所示序列相同的核苷酸序列。