[發明專利]DC細胞培養方法、培養基和基于DC治療策略的藥物及酪氨酸激酶抑制劑在制備其的應用

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• 申請號: 202110254692.2
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN112852732A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 代景瑩;何林;夏靜儀;曹婉君
• 申請（專利權）人: 四川省人民醫院
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784;A61K39/00;A61K35/17;A61P35/02
• 代理公司: 北京市領專知識產權代理有限公司 11590
• 代理人: 張玲;陳夏

本發明公開了DC細胞培養方法、培養基和基于DC治療策略的藥物及酪氨酸激酶抑制劑在制備其的應用；其中，DC細胞培養方法在誘導分化未成熟DC細胞的培養過程中，于培養基中加入酪氨酸激酶抑制劑，經誘導分化培養獲得成熟DC細胞；培養基為含有酪氨酸激酶抑制劑的細胞培養基，并可用于未成熟DC細胞誘導分化為成熟DC細胞的培養；基于DC治療策略的藥物中含有酪氨酸激酶抑制劑；酪氨酸激酶抑制劑可用于制備基于DC治療策略的藥物。上述方案能解決目前DC細胞培養方法不能滿足于臨床療效所需高度成熟或高活性的DC細胞的問題，達到提高DC細胞成熟度或活性的目的。

技術領域

本發明涉及DC細胞相關技術領域，尤其涉及DC細胞培養方法、培養基和基于DC治療策略的藥物及酪氨酸激酶抑制劑在制備其的應用。

背景技術

DC細胞(樹突狀細胞)作為最重要的抗原呈遞細胞，可以通過引發幼稚T細胞并促進其向Th細胞和細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的增殖和分化，在抗腫瘤免疫中發揮重要作用。

在過去的幾十年中，基于DC細胞的抗腫瘤治療策略迅速發展；例如，培養自體樹突狀細胞以增強其活性、之后再回輸患者體內的方式為當前研究及應用的前沿技術，其不僅可有效激發出腫瘤患者體內的抗腫瘤免疫應答、在研究與應用中顯示出良好的療效，而且對于健康人群或免疫力降低人群可以起到提高機體免疫力、防治疾病、預防疾病發生發展的保健作用。

但是，由于血液腫瘤慢性粒細胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)患者具有免疫力顯著低下的特征，所以免疫活性低下或免疫缺陷的樹突狀細胞是導致體外培養、活化患者自體樹突狀細胞效果不理想，以及自體樹突狀細胞回輸患者體內后臨床療效不理想的主要原因。

而現有的DC細胞培養方法中，通過外周血單個核細胞于基礎培養基中先經GM-CSF和IL-4誘導產生未成熟DC細胞，再經TNF-α、PGE2和IL-6刺激誘導分化為成熟DC細胞；其雖然可以使得患者自體DC細胞一定程度上具有成熟度或活性，但是其與臨床療效所需的高度成熟或高活性DC細胞仍存在差距。

發明內容

本發明公開一種DC細胞培養方法、培養基和基于DC治療策略的藥物及酪氨酸激酶抑制劑在制備其的應用，以解決目前DC細胞培養方法不能滿足于臨床療效所需高度成熟或高活性的DC細胞的問題，達到提高DC細胞成熟度或活性的目的。

為了解決上述問題，本發明采用下述技術方案：

第一方面，本發明提供了一種DC細胞培養方法，其在誘導分化未成熟DC細胞的培養過程中，于培養基中加入酪氨酸激酶抑制劑，經誘導分化培養獲得成熟DC細胞。

可選地，所述酪氨酸激酶抑制劑為伊馬替尼、達沙替尼和尼洛替尼中的至少一種。

可選地，DC細胞培養方法包括以下步驟：將外周血單個核細胞進行貼壁粘附2小時，之后留下其中貼壁細胞于DCⅠ培養基中培養，所述培養基為添加有血清、GM-CSF和IL-4的基礎培養基，經誘導培養產生所述未成熟DC細胞；再于所述DCⅠ培養基中加入誘導分化刺激物和所述酪氨酸激酶抑制劑，經繼續培養后獲得所述成熟DC細胞。

可選地，所述誘導分化刺激物包括細胞因子TNF-α、IL-6和PGE2。

可選地，所述誘導分化刺激物還包括抗原肽MART-1_aa26-35*A27L。

可選地，所述基礎培養基為由RPMI 1640和L-谷氨酰胺組成的基礎培養基。

第二方面，本發明提供了一種培養基，所述培養基為含有酪氨酸激酶抑制劑的細胞培養基，并可用于未成熟DC細胞誘導分化為成熟DC細胞的培養。

第三方面，本發明提供了一種基于DC治療策略的藥物，所述基于DC治療策略的藥物中含有酪氨酸激酶抑制劑。