[發(fā)明專利]一種DNA納米結(jié)構(gòu)標(biāo)記細(xì)胞目的蛋白的熒光染色方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110249529.7
• 申請(qǐng)日: 2021-03-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113514429B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬炯;姚龍芳;糜嵐;張麗;陳麗雯;王保舉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué);珠海復(fù)旦創(chuàng)新研究院
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 王潔平

1.一種DNA納米結(jié)構(gòu)標(biāo)記細(xì)胞目的蛋白的熒光染色方法，其特征在于，其用鏈霉親和素作中間物，將DNA納米結(jié)構(gòu)和修飾有生物素的目的蛋白的抗體連接在一起，從而標(biāo)記目的蛋白；其中：所述DNA納米結(jié)構(gòu)上同時(shí)修飾有生物素、錨定在水凝膠上的基團(tuán)和兩個(gè)以上熒光染料分子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光染色方法，其特征在于，DNA納米結(jié)構(gòu)為DNA雙鏈結(jié)構(gòu)或者DNA四面體結(jié)構(gòu)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光染色方法，其特征在于，熒光染料分子為同一種或不同種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光染色方法，其特征在于，熒光染料分子是熒光共振能量轉(zhuǎn)移染料對(duì)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光染色方法，其特征在于，DNA納米結(jié)構(gòu)中的錨定在水凝膠上的基團(tuán)為丙烯酰胺基團(tuán)。

6. 根據(jù)權(quán)利要求 1所述的熒光染色方法，其特征在于，具體步驟如下：

1) 合成同時(shí)修飾有生物素、錨定在水凝膠上的基團(tuán)和兩個(gè)以上熒光染料分子的DNA納米結(jié)構(gòu)；

2) 細(xì)胞培養(yǎng)和染色

將細(xì)胞鋪在細(xì)胞爬片上，若干小時(shí)之后，將細(xì)胞固定，穿孔，封閉之后，將目標(biāo)蛋白的接有生物素的抗體用1%BSA溶液稀釋并孵育到封閉好的細(xì)胞上，或者潤(rùn)洗之后將接有生物素的二抗稀釋之后孵育到細(xì)胞上，潤(rùn)洗之后將用PBS稀釋好的鏈霉親和素孵育到細(xì)胞上，潤(rùn)洗之后將用PBS稀釋好的DNA納米結(jié)構(gòu)溶液孵育到細(xì)胞上；

3）膨脹顯微技術(shù)樣品處理

將用DNA納米結(jié)構(gòu)孵育好的細(xì)胞用單體溶液室溫處理；過(guò)硫酸銨APS和四甲基乙二胺用水制成母液，用單體溶液稀釋成凝膠溶液；凝膠溶液加到聚四氟乙烯圓孔中，隨后將蓋玻片細(xì)胞面朝下置于凝膠溶液上面，室溫靜置直至完全凝固，凝固之后用蛋白酶K溶液消化；之后將樣品放入去離子水中膨脹，期間換水，直至完全膨脹；

4）膨脹樣品顯微成像

將膨脹好的樣品切成合適的大小放到玻璃底培養(yǎng)皿中，用顯微鏡進(jìn)行Airyscan成像。