[發明專利]一種吲哚喹啉酸有關物質的RT-HPLC檢測方法

在審

• 申請號: 202110249021.7
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN115032285A
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 朱麗君;陳群;陳思;楊建楠;周靜;羅琦;趙卿;李戰
• 申請（專利權）人: 遠大生命科學（武漢）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 武漢智權專利代理事務所(特殊普通合伙) 42225
• 代理人: 牛晶晶

本發明屬于藥物分析技術領域，特別涉及一種吲哚喹啉酸有關物質的RT?HPLC檢測方法。本發明公開了吲哚喹啉酸的相關4個雜質分離的分析方法：配置分析溶液；使用反相色譜柱，以酸銨鹽溶液?有機相的混合液為流動相，采用梯度洗脫方法；將配置好的分析溶液上機測定。本發明分析方法能夠有效且準確的測定吲哚喹啉酸中雜質及異構體雜質，從而確保產品的質量可控。

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，特別涉及一種吲哚喹啉酸及其降解雜質和工藝雜質的反向高效液相色譜檢測方法。

背景技術

在藥物分析中所稱的“有關物質(related substances)”是指在原料藥生產過程中帶入的起始原料、試劑、中間體、副產物和異構體等物質，也可能是制劑在生產、貯藏和運輸過程中產生的降解產物、聚合物或晶型轉變等特殊雜質。有關物質的種類與藥物的合成路線和制劑工藝密切相關，藥物在合成和制劑過程中的任何一個因素的改變都可能導致其有關物質的種類不同，因而有關物質的檢測和控制過程相對復雜。有關物質的檢測是控制藥品質量的重要指標。

吲哚喹啉酸，化學名為(6aR,9R)-7-甲基-4,6,6a,7,8,9-六氫吲哚并[4,3-fg]喹啉-9-羧酸叔丁酯，其結構式如下：

在吲哚喹啉酸原料藥生產過程中帶入的起始原料、試劑、中間體、副產物和異構體等雜質，確定相關雜質譜：雜質A、B、DMAP(4-二甲氨基吡啶)、吲哚喹啉酸異構體(見表1)。

表1吲哚喹啉酸各雜質名稱及結構

現有文獻中未見對吲哚喹啉酸相關雜質的質量控制，也無能夠分離上述4種雜質的分析方法，缺乏對于吲哚喹啉酸雜質檢測的有效手段，無法滿足化合物制備及工藝優化過程對于產物情況的監測，無法滿足化合物含量、質量相關研究。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種高靈敏度的檢測方法，解決將吲哚喹啉酸特征峰與降解雜質、較多的合成中間體及工藝雜質特征峰分離的問題。

本發明技術方案如下：

吲哚喹啉酸的有關物質的RT-HPLC檢測方法，包括下列步驟：

a)配置分析溶液

用甲醇、乙腈單一溶劑或甲醇-水、乙腈-水混合溶液溶解樣品，制成分析溶液；

b)色譜條件

色譜柱為反相色譜柱，

以酸銨鹽溶液-有機相的混合液為流動相，流動相pH范圍7.5～9.0，所述的有機相為甲醇或乙腈；采用梯度洗脫方法，流速為1.0-2.5ml/min；柱溫為25-50℃，檢測波長為210-350nm；

c)上機測定

取步驟a)制成的分析溶液5-40μl注入高效液相色譜儀，進行色譜分析，并記錄色譜圖。在一些實施例中，所述反相色譜柱的填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，優選為Agilent Poroshell HPH-C₁₈或Phenomenex Luna C₁₈。

在一些實施例中，所述反相色譜柱的規格為：柱長介于50mm至300mm，色譜柱內徑介于1mm至10mm，粒徑介于1μm至10μm，優選為Agilent Poroshell HPH-C₁₈(4.6mm×100mm，2.7μm)的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱。

在一些實施例中，所述酸銨鹽溶液的濃度為0.2-3g/L，優選酸銨鹽溶液的濃度為2g/L。

在一些實施例中，所述酸銨鹽為甲酸銨、乙酸銨、碳酸氫銨、氨基甲酸銨中之一，優選氨基甲酸銨。