[發明專利]一種谷氨酸脫羧酶及γ-氨基丁酸高產菌株

有效

• 申請號: 202110238958.4
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112831488B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 方海田;張恒;劉慧燕;潘琳;趙春光
• 申請（專利權）人: 寧夏大學
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

1.一種谷氨酸脫羧酶突變體，其特征在于，是在SEQ ID NO.1所示野生型谷氨酸脫羧酶氨基酸序列的基礎上發生第62位氨基酸由T突變為S或第309位氨基酸由Q突變為A所得的谷氨酸脫羧酶突變體，氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.3或5所示。

2.權利要求1所述谷氨酸脫羧酶突變體的編碼基因。

3.如權利要求2所述的編碼基因，其特征在于，如序列表SEQ ID NO.4或6所示。

4.包含權利要求2所述編碼基因的重組載體或重組菌株。

5.如權利要求4所述的重組菌株，其特征在于，是在大腸桿菌宿主細胞中表達權利要求1所述谷氨酸脫羧酶突變體的編碼基因所得。

6.如權利要求5所述的重組菌株，其特征在于，所述大腸桿菌宿主細胞為大腸桿菌E.coli BL21(DE3)，所述谷氨酸脫羧酶突變體編碼基因如序列表SEQ ID NO.4或6所示。

7.權利要求1所述谷氨酸脫羧酶突變體在生產γ-氨基丁酸中的應用。

8.權利要求4所述重組載體或重組菌株在生產γ-氨基丁酸中的應用。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，采用所述重組菌株搖瓶發酵生產γ-氨基丁酸的方法如下：將培養好的種子液以2％的接種量接種于發酵培養基中，控制pH在6.0-7.0之間，溫度在36.5-37.5℃之間，180-200r/min，搖瓶發酵48-50h。

10.如權利要求8所述的應用，其特征在于，采用所述重組菌株發酵罐發酵生產γ-氨基丁酸的方法如下：將培養好的種子液以5-10％的接種量接種于發酵培養基中，待OD₆₀₀達到50左右，添加終濃度0.2mM IPTG進行誘導；

發酵中控制pH在6.0-7.0之間，溫度在36.5-37.5℃之間，轉速為220～240r/min，溶氧量為30％左右；發酵中以恒速補料的方式，將補料培養基加入發酵罐中，控制發酵液中葡萄糖濃度在15-20g/L，控制蔗糖濃度為3-5g/L，控制L-谷氨酸含量在45-50g/L，發酵時長30-32h。