[發明專利]基于RAA技術檢測I群4型禽腺病毒的引物探針組合及試劑盒

在審

• 申請號: 202110238913.7
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112746135A
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 鄒海濤;馬廣斌;李陽;馬麗;宋金棟;宋美瑩;李廣森;王永堅;鹿洪偉
• 申請（專利權）人: 山東信達基因科技有限公司;山東信得科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 于晶晶

1.一種基于RAA技術檢測I群4型禽腺病毒的引物探針組合，引物包括上游引物和下游引物，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，其中，探針的5′端第23位T堿基標記羧基熒光素，第24位堿基連接脫堿基位點四氫呋喃，第25位堿基標記BHQ1淬滅基團，3′端進行C3-spacer阻斷修飾。

2.根據權利要求1所述的基于RAA技術檢測I群4型禽腺病毒的引物探針組合，其特征在于，引物探針組合中的引物和探針是以I群4型禽腺病毒特異性Hexon基因為目的基因進行設計獲得，其中，所述下游引物的核苷酸序列為對應I群4型禽腺病毒特異性Hexon基因的第1091位堿基前后的核苷酸序列的反向互補序列，且下游引物的核苷酸序列中與I群4型禽腺病毒特異性Hexon基因第1091位堿基對應的堿基設為簡并堿基R。

3.根據權利要求1所述的基于RAA技術檢測I群4型禽腺病毒的引物探針組合，其特征在于，所述引物探針組合應用在非疾病診斷目的的基于RAA技術檢測I群4型禽腺病毒的檢測中，且基于RAA技術檢測I群4型禽腺病毒的檢測方法包括如下步驟：

（1）配置陰性對照、陽性對照以及待檢測樣品的RAA反應體系，其中，RAA反應體系中所使用的引物探針組合為權利要求1所述的引物探針組合；

（2）RAA反應體系擴增；

（3）根據RAA反應體系的擴增曲線判定待測樣品中是否含有I群4型禽腺病毒，待測樣品中是否含有I群4型禽腺病毒的判定方式為：

在陰性對照RAA反應體系經擴增反應后無擴增曲線，且陽性對照RAA反應體系經擴增反應后出現擴增曲線的前提下，待檢測樣品的RAA反應體系擴增反應后具有擴增曲線，則樣品為陽性，待檢測樣品的RAA反應體系擴增反應后無擴增曲線，則樣品為陰性。

4.一種基于RAA技術檢測I群4型禽腺病毒的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物探針組合。

5.根據權利要求4所述的基于RAA技術檢測I群4型禽腺病毒的試劑盒，其特征在于，還包括RAA反應的試劑。