[發(fā)明專利]一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測試劑盒及檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110231827.3
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN113009033A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張召;刁嘉茵;鄭康帝;陳濤
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東南芯醫(yī)療科技有限公司;佛山市朗芯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王敏

本發(fā)明公開了一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測試劑盒及檢測方法，屬于分析檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開的一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測試劑盒，可以對人體內(nèi)葉酸代謝衍生物中的葉酸、四氫葉酸、5?甲基四氫葉酸、5?甲酰四氫葉酸、5,10?亞甲基四氫葉酸、S?腺苷甲硫氨酸、S?腺苷同型半胱氨酸和同型半胱氨酸血清(血漿)含量進(jìn)行檢測；方法具有簡單，快捷，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，檢測指標(biāo)全面等特點(diǎn)；可以在臨床應(yīng)用中，為了解葉酸代謝情況提供參考依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體的說是涉及一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

葉酸(folate)是一類物質(zhì)的總稱，其中包括了葉酸(folic acid)及其衍生物5-甲酰四氫葉酸(5-FoTHF，亞葉酸)，5-甲基四氫葉酸(5-MeTHF)，5,10-亞甲基四氫葉酸和四氫葉酸(THF)等。葉酸主要影響DNA合成和DNA甲基化兩個(gè)過程，一方面是尿嘧啶脫氧核苷酸(dUMP)到胸腺嘧啶脫氧核苷酸(dTMP)的轉(zhuǎn)化，dUMP因葉酸缺乏導(dǎo)致積累，而錯(cuò)誤摻入DNA。大量摻入的dUMP在隨后的DNA復(fù)制和修復(fù)過程中容易誘發(fā)基因突變、DNA單雙鏈斷裂、染色體斷裂等基因組穩(wěn)定性下降事件及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。另一方面是5-甲基四氫葉酸在催化下將甲基轉(zhuǎn)移到同型半胱氨酸上，使其轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸，隨即形成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)，SAM是胞嘧啶甲基化過程中的甲基供體。葉酸攝入不足將影響同型半胱氨酸代謝途徑，導(dǎo)致DNA和RNA甲基化異常及改變基因表達(dá)，從而引發(fā)各類相關(guān)疾病的發(fā)生。

目前，葉酸檢測多以化學(xué)發(fā)光法為主，常常單獨(dú)測試葉酸及同型半胱氨酸，主要因?yàn)榇朔椒ň哂凶詣?dòng)化程度高，重現(xiàn)性好，靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。但是，化學(xué)發(fā)光法無法對葉酸代謝中的多種衍生物同時(shí)進(jìn)行檢測。質(zhì)譜平臺上，以往報(bào)道多以葉酸和同型半胱氨酸、半胱氨酸等組合或葉酸與5-甲基四氫葉酸、5-甲酰四氫葉酸等組合，都只能對葉酸代謝衍生物的其中一個(gè)影響路徑指標(biāo)進(jìn)行測試。

因此，提供一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測試劑盒及檢測方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測試劑盒及檢測方法，基于液相串聯(lián)質(zhì)譜平臺全面對葉酸代謝過程中的多種關(guān)鍵化合物進(jìn)行定量檢測，方法高效，靈敏，檢測下限較低，而且準(zhǔn)確度高，能對整個(gè)葉酸代謝水平進(jìn)行全面評估。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測試劑盒，包括如下組分：

進(jìn)一步，所述校準(zhǔn)品的組成如下：

進(jìn)一步，所述質(zhì)控品的組成如下：

一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，采用液相串聯(lián)質(zhì)譜法：先用提取試劑對樣本(校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、血清(血漿)樣本)提取純化，然后再通過液相串聯(lián)質(zhì)譜儀對各個(gè)衍生物進(jìn)行分離，檢測。

一種測試人體葉酸代謝衍生物的液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，對葉酸代謝的衍生物：葉酸、四氫葉酸、5-甲基四氫葉酸、5-甲酰四氫葉酸、5,10-亞甲基四氫葉酸、S-腺苷甲硫氨酸、S-腺苷同型半胱氨酸和同型半胱氨酸進(jìn)行區(qū)分，并準(zhǔn)確檢測；利用所述的試劑盒進(jìn)行檢測，具體步驟如下：

(1)取100～200μL樣本(血清、校準(zhǔn)品或質(zhì)控品)至Ep管中，加入5μL混合內(nèi)標(biāo)溶液后，加入500μL提取液1后渦旋振蕩1min，混勻；

(2)離心后轉(zhuǎn)移400～500μL上清于96孔進(jìn)樣板中；

(3)氮?dú)獯蹈桑?/p>