[發(fā)明專利]一種巖藻糖轉移酶8(FUT8)功能缺失細胞株的構建方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110228894.X
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN113061605B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發(fā)明（設計）人: 袁燕秋;毛洋;王圣鈞;王軍艦;何羽騏;鐘雨倫
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N5/10;C12N15/85;C12N15/11;C12Q1/6869;C12Q1/6888;C12Q1/04
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

1.一種巖藻糖轉移酶8功能缺失細胞株，其特征在于，所述細胞株表達的巖藻糖轉移酶8蛋白序列如SEQ ID NO.2；所述的巖藻糖轉移酶8功能缺失細胞株的構建方法，包括以下步驟：

（1）培養(yǎng)細胞株；

（2）混合構建質粒和堿基編輯器，孵育，得到轉染試劑；

（3）混合轉染試劑和培養(yǎng)細胞株，孵育；

（4）觀察細胞，判斷轉染情況，轉染成功即得巖藻糖轉移酶功能缺失細胞株；

（5）分選帶有熒光的單克隆細胞；

（6）測序檢測確定巖藻糖轉移酶8功能缺失細胞株；

其中，所述判斷轉染情況為：觀察細胞熒光，如有熒光，則細胞轉染成功；

所述質粒中包含用于構建巖藻糖轉移酶8功能缺失細胞株的靶向序列和熒光蛋白，所述靶向序列的序列為5’-TGTCAGACGCACTGACAAAG-3’（SEQ ID NO.1）；所述堿基編輯器為腺嘌呤堿基編輯器；

所述細胞株為生產不含有巖藻糖的抗體藥物的工程細胞。

2.根據權利要求1所述的細胞株，其特征在于，所述構建質粒的序列如SEQ ID NO.3。

3.根據權利要求1所述的細胞株，其特征在于，所述堿基編輯器包括ABEmax腺嘌呤堿基編輯器。

4.根據權利要求1所述的細胞株，其特征在于，所述測序的引物序列為5’-TCTGTTGATTCCAGGTTCCCA-3’（SEQ ID NO.4）。

5.根據權利要求1所述的細胞株，其特征在于，所述細胞株包括CHO細胞、HEK293細胞。

6.權利要求1～5任一項所述細胞株在制備抗體藥物中的應用。