[發(fā)明專利]凡納濱對蝦雌性DNA標簽序列和引物及其在性別鑒定中應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2021-02-24
• 公開（公告）號: CN112746116B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于洋;王悅;李富花
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明公布了一種凡納濱對蝦雌性個體DNA的標簽序列LvSDP，該序列在雌雄個體具有明顯的PCR擴增差異，根據(jù)該序列，本發(fā)明設(shè)計了一種新型簡便的對凡納濱對蝦的遺傳性別進行鑒定的方法，利用引物(LvSDPF:ACGTAAGCCAAGAGAGGGAA和LvSDPR:TCAAGATGGCTGGCTTTGTTG)對凡納濱對蝦的DNA進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物使用瓊脂糖凝膠電泳進行分析，在雌性個體中能夠擴增出470bp的單一條帶，而在雄性個體中無擴增產(chǎn)物，即可實現(xiàn)對其性別的快速鑒定。本發(fā)明提供的對蝦的遺傳性別鑒定方法操作簡便，準確率高，在凡納濱對蝦的性別控制和全雌苗種培育中具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)動物性別控制研究領(lǐng)域，具體涉及一種凡納濱對蝦雌性DNA標簽序列及其在性別鑒定中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

凡納濱對蝦是我國乃至世界養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的對蝦品種，在我國的養(yǎng)殖年產(chǎn)量達150萬噸，世界養(yǎng)殖年產(chǎn)量近400萬噸。養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展離不開種業(yè)的創(chuàng)新，培育生長速度快的品種是遺傳育種的首要目標。對蝦雌雄個體在性成熟后生長差異顯著，雌性顯著大于雄性，因此培育和篩選全雌苗種對于提高養(yǎng)殖產(chǎn)量具有重要意義。

凡納濱對蝦的性別決定方式為ZW/ZZ型，雌性個體為ZW雜合型，雄性個體為ZZ純合型。全雌或者高雌性比例苗種獲得的一種方式是早期篩選，即在幼蝦時期僅篩選出雌性個體進行養(yǎng)殖，從而提高雌性個體比例和提高養(yǎng)殖產(chǎn)量；另外一種方式是通過生殖和遺傳操作方式培育出假雄個體(ZW)，將假雄個體與雌性個體(ZW)進行交配后篩選超雌個體(WW)，之后將超雌個體與雄性個體(ZZ)交配生產(chǎn)全雌個體(ZW)。

不管是通過早期篩選技術(shù)還是生殖遺傳操作技術(shù)，首先需要建立快速準確的遺傳性別鑒定方法。前期研究已經(jīng)鑒定到了凡納濱對蝦雌雄差異的SNP位點(Yang Yu,XiaojunZhang,Jianbo Yuan,Quanchao Wang,Shihao Li,Hao Huang,Fuhua Li,JianhaiXiang.Identification of sex-determining loci in Pacific white shrimpLitopeneaus vannamei using linkage and association analysis.MarineBiotechnology,2017,19(3):277–286)，并根據(jù)此SNP位點建立了遺傳鑒定的方法(李富花，于洋，張曉軍，相建海。一種用于凡納濱對蝦遺傳性別鑒定的DNA探針序列及獲取方法，專利號：ZL 201510245304.9)。由于SNP位點的分型需要測序、HRM等SNP分型儀器，因此操作較為復(fù)雜，且對實驗條件的要求較高。

本發(fā)明在前期研究的基礎(chǔ)上，發(fā)掘了一段雌雄差異的序列，該序列在雌雄個體中PCR擴增的產(chǎn)物具有明顯的差異。根據(jù)此差異序列，本發(fā)明建立了一種新型簡便的凡納濱對蝦遺傳性別鑒定方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種凡納濱對蝦雌性DNA標簽序列及其在性別鑒定中的應(yīng)用，將促進凡納濱對蝦遺傳性別篩選和性別控制研究。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種凡納濱對蝦雌性個體DNA的標簽序列，具有LvSDP所示的序列，該序列在雌雄個體的DNA中具有明顯的差異，具體表現(xiàn)為：(1)按照該序列的1bp-1296bp所在位置范圍內(nèi)設(shè)計引物使用Taq酶進行PCR擴增時，擴增產(chǎn)物使用瓊脂糖凝膠電泳進行分析，僅在雌性個體中能夠擴增出條帶，雄性個體無條帶；(2)該序列的1531bp-1539bp序列為雌性特有，其他序列雌雄均存在。

本發(fā)明根據(jù)上述雌雄差異序列建立了一種適用于凡納濱對蝦的新型簡便的遺傳性別鑒定的方法：

(1)取凡納濱對蝦幼蝦的附肢，之后將幼蝦單獨放到一個燒杯或者其他容器中單獨養(yǎng)殖，并做好標記。