[發明專利]一種貓體液樣本核酸提取前處理試劑及核酸提取方法

在審

• 申請號: 202110207262.5
• 申請日: 2021-02-24
• 公開（公告）號: CN112813061A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 屈萍萍;張曉婷
• 申請（專利權）人: 上海基靈生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 陳秋夢

1.一種貓體液樣本核酸提取前處理試劑，其特征在于，其包括質量體積濃度為1-10％的蛋白質二硫鍵還原劑，所述貓體液樣本為貓胸腹水或痰液。

2.根據權利要求1所述的貓體液樣本核酸提取前處理試劑，其特征在于，所述蛋白質二硫鍵還原劑為三(2-羧乙基)膦、三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽、二硫蘇糖醇、N-乙酰-L-半胱氨酸和β-巰基乙醇中的至少一種；

優選地，所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑包括質量體積濃度為1.3％的蛋白質二硫鍵還原劑；

優選地，所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑的溶劑為DEPC處理水。

3.根據權利要求1或2所述的貓體液樣本核酸提取前處理試劑，其特征在于，所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑還包括表面活性劑、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽和胍鹽中的至少一種；

優選地，所述表面活性劑為SDS、Tween 20、Triton X-100、NP-40和十二烷基肌氨酸鈉中的至少一種；優選地，所述表面活性劑的質量體積濃度為1-20％；

優選地，所述胍鹽為異硫氰酸胍、鹽酸胍、硝酸胍、碳酸胍、乙酸胍、辛酸胍、苯基碳酸胍、四甲基胍或二苯胍；

優選地，所述胍鹽的質量體積濃度為20-30％；

優選地，所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑中所述三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽的濃度為10-20mM，優選地，所述三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽的pH為5-6。

4.根據權利要求3所述的貓體液樣本核酸提取前處理試劑，其特征在于，所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑還包括體積百分比為3-10％的Triton X-100、質量體積百分比為0.5-4％的SDS、10-20mM的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽和質量體積百分比為20-30％的異硫氰酸胍。

5.根據權利要求4所述的貓體液樣本核酸提取前處理試劑，其特征在于，所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑還包括體積百分比為5％的Triton X-100、質量體積百分比為2％的SDS、10mM的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽和質量體積百分比為23％的異硫氰酸胍。

6.一種檢測試劑盒，其特征在于，其包括權利要求1-5任一項所述的貓體液樣本核酸提取前處理試劑。

7.一種使用權利要求1-5任一項所述的貓體液樣本核酸提取前處理試劑進行核酸提取的方法，其特征在于，其包括如下步驟：將待提取核酸的樣本與所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑混合，取上清液進行核酸提取。

8.根據權利要求7所述的核酸提取的方法，其特征在于，所述待提取核酸的樣本與所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑的混合體積比例為(0.5-2):1；

優選地，將待提取核酸的樣本與所述貓體液樣本核酸提取前處理試劑混合后，進行離心，取上清進行核酸提取。

9.根據權利要求7所述的核酸提取的方法，其特征在于，所述核酸提取為磁珠法核酸提取。

10.一種如權利要求1-5任一項所述的貓體液樣本核酸提取前處理試劑在制備熒光定量PCR檢測貓冠狀病毒試劑盒中的應用。