[發明專利]一種貓體液樣本處理試劑、檢測試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202110205150.6
• 申請日: 2021-02-24
• 公開（公告）號: CN112921071A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 孫堯;屈萍萍;徐瀅;王佳琳;張曉婷
• 申請（專利權）人: 上海基靈生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6851;C12N15/10
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 陳秋夢

本發明公開了一種貓體液樣本處理試劑、檢測試劑盒及應用，涉及生物化學技術領域。本發明提供了一種貓體液樣本處理試劑，其包括質量體積濃度為1?20％的三氯乙酸和水。利用三氯乙酸可以與樣本中的蛋白反應生成蛋白質鹽不溶物，同時三氯乙酸又作為蛋白質變性劑可以促使蛋白質的構象發生改變，從而使得蛋白質暴露出較多的疏水性基團，有利于蛋白質聚集沉淀，從而提升樣本中核酸的純度。

技術領域

本發明涉及生物化學技術領域，具體而言，涉及一種貓體液樣本處理試劑、檢測試劑盒及應用。

背景技術

貓冠狀病毒(Feline Covronavirus，FCoV)的感染在貓群中極為普遍，目前，貓冠狀病毒有兩種表現型：引起貓傳染性腹膜炎的變異型(Feline Infectious Peritonitis，FIP)和普通貓冠狀病毒。FCoV感染后一般引起較輕的胃腸道癥狀；FIP的臨床表現主要分為滲出型和非滲出型兩類，滲出型FIP以腹膜炎、大量腹水聚集為主要癥狀，非滲出型FIP以眼部以及神經癥狀為主，致死率非常高。臨床上一般用貓胸腹水樣本來檢測貓冠狀病毒(FCoV)的核酸，快速、準確地診斷FCoV，對該病的臨床診斷及治療有著重要的意義。

一般可使用磁珠法提取核酸及實時熒光定量PCR法檢測貓糞便、直腸拭子、胸水、腹水等樣本中的貓冠狀病毒。

其中，磁珠法核酸提取是指利用可結合核酸分子的磁性微粒為載體，樣品在與裂解液、磁性微粒混合后，核酸吸附在磁性微球表面。這種特定的吸附作用使DNA在外加磁場的作用下與樣本中的其它組分分離。在簡單的清洗和洗脫后，即可得到高純度的核酸。

而實時熒光定量PCR是指在PCR擴增過程中，高溫變性，核酸雙鏈解離為單鏈；退火時，病毒的引物探針與靶核酸特異性地結合；在延伸階段，模板-引物的結合物在聚合酶、dNTP等的作用下開始進行互補鏈的延伸，同時聚合酶的外切活性將探針上的熒光基團剪切下來，使其遠離于探針另一端的淬滅基團，發出熒光。這樣，熒光信號的累積與PCR產物的形成完全同步。通過儀器監測熒光信號即可完成對PCR過程的實時監控。內參是指選用與靶核酸無關聯的外源非競爭性內參質粒。在實驗過程中，內參樣品跟隨待測樣品同時進行核酸提取與擴增，最終內參結果為陽性，即可證明實驗結果的有效性。

目前，用磁珠法提取蛋白總量較多的貓胸腹水樣本核酸時存在以下缺點：直接將貓胸腹水樣本用磁珠法核酸提取時容易發生磁珠聚集，洗滌過程中磁珠難以混勻，提取后的核酸純度較差，不能滿足熒光定量PCR對核酸純度的要求。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種貓體液樣本處理試劑、檢測試劑盒及應用以解決上述技術問題。

發明人發現，磁珠法核酸提取試劑盒里的蛋白酶K很難充分消化黏蛋白，裂解不充分，導致核酸的雜蛋白含量較高，從而抑制了實時熒光定量PCR。特提供了一種樣本處理試劑。

本發明是這樣實現的：

本發明提供了一種貓體液樣本處理試劑，其包括質量體積(g/ml)濃度為1-20％的三氯乙酸溶液，樣本為貓胸腹水。

在本發明應用較佳的實施方式中，上述試劑包括質量體積濃度為1-10％的三氯乙酸溶液；

優選地，貓體液樣本處理試劑包括質量體積濃度為1.5％的三氯乙酸溶液；

優選地，三氯乙酸溶液的溶劑為DEPC處理水。

在本發明應用較佳的實施方式中，上述貓體液樣本處理試劑還包括表面活性劑和螯合劑；

優選地，表面活性劑為SDS、Tween 20、Triton X-100、NP-40和十二烷基肌氨酸鈉中的至少一種；

優選地，螯合劑為有機螯合劑或無機螯合劑；