[發(fā)明專(zhuān)利]噬菌體展示技術(shù)篩選可穿越血-腦脊液屏障的多肽

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110201329.4
• 申請(qǐng)日: 2021-02-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112851759B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李婧煒;李永杰;楊茜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 李婧煒
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/06
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/06;A61K47/62;A61K47/69;A61P9/10;A61P25/00;A61P25/24;A61P25/28
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本發(fā)明公開(kāi)了一種噬菌體展示技術(shù)篩選可穿越血?腦脊液屏障的多肽，它涉及蛋白質(zhì)多肽技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的生物活性肽能經(jīng)血液循環(huán)跨越血?腦脊液屏障，滲入腦脊液并在腦脊液中富集。本發(fā)明涉及一種通過(guò)噬菌體展示技術(shù)獲得跨越血?腦脊液屏障的肽的方法。所述的多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1?4所示，分別為CMRTHHMQC、CMWTHHYQC、CMRTHHYQC、CMWTHHMQC。利用本發(fā)明所述的肽構(gòu)建具有靶向性的藥物載體，從而使藥物載體于腦脊液中富集，可用于腦部疾病的診斷及治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是蛋白質(zhì)多肽技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種噬菌體展示技術(shù)篩選可穿越血-腦脊液屏障的多肽。

背景技術(shù)

隨著人類(lèi)社會(huì)老齡化問(wèn)題日趨嚴(yán)重，腦部疾病的發(fā)病率正呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，腦部疾病尤其是中樞系統(tǒng)疾病正威脅人類(lèi)的生命與健康。通常情況下腦部疾病指顱內(nèi)組織器官（腦膜血管、大腦、小腦、腦干、顱神經(jīng)等）的炎癥、血管病、腫瘤、變性、畸形、遺傳病、免疫性疾病、營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病、中毒、外傷、寄生蟲(chóng)病等的總稱。病情各異，有的還直接危及生命。常表現(xiàn)意識(shí)、感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)等障礙或植物神經(jīng)功能障礙。亦可有發(fā)熱、頭痛、嘔吐等癥狀及精神癥狀。

血-腦屏障(BBB)是血液與神經(jīng)實(shí)質(zhì)的調(diào)節(jié)界面，不僅有被動(dòng)機(jī)械性保護(hù)屏障作用，且能有選擇性地將腦內(nèi)過(guò)剩物質(zhì)泵出腦外，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理平衡，保持腦的內(nèi)環(huán)境恒定。以往研究表明，BBB的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞與脈絡(luò)叢上皮。腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上有其獨(dú)特的酶系統(tǒng)，脈絡(luò)叢也具有主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的酶系統(tǒng)。能使某些藥物降解，這些酶從而構(gòu)成BBB的酶屏障，阻止相應(yīng)的底物入腦，對(duì)BBB的通透性具有不可忽視的作用。如多巴胺脫羧酶能使L-多巴和L-5-羥色胺酸脫羧生成不易透過(guò)BBB的L-多巴胺和L-5-羥色胺，使用單胺氧化酶抑制劑后方能透過(guò)BBB；腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上的P-糖蛋白等有外排泵的作用，它能選擇性地將腦內(nèi)有害物質(zhì)或過(guò)剩物質(zhì)泵出腦外，并限制某些物質(zhì)在腦內(nèi)遞送。血腦屏障的酶屏障及外排泵的結(jié)構(gòu)與功能對(duì)腦組織相對(duì)內(nèi)環(huán)境恒定的維持起到一定的作用，但在對(duì)腦疾病治療中限制了藥物進(jìn)入腦內(nèi)。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)，由于血腦屏障的存在，目前臨床常規(guī)制劑用藥后，大約有98％的化學(xué)藥物和幾乎100％的蛋白多肽或基因藥物難以入腦，這極大程度限制了對(duì)腦部疾病的治療。

血腦脊液屏障（BCSFB）是位于血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)之間的選擇性調(diào)節(jié)界面，這個(gè)調(diào)節(jié)界面可以通過(guò)調(diào)節(jié)大腦的化學(xué)環(huán)境、免疫細(xì)胞的運(yùn)輸?shù)葋?lái)維持大腦環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，同時(shí)血腦脊液屏障也可以處置外來(lái)物質(zhì)。血腦脊液屏障是由中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元共同組成的一種功能性的細(xì)胞復(fù)合體。其中內(nèi)皮細(xì)胞能夠形成控制藥物、外源性物質(zhì)、內(nèi)源性肽和其它化合物轉(zhuǎn)運(yùn)的物理屏障。脈絡(luò)叢的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上有窗孔，因此血-腦脊液屏障與血腦屏障相比具有一定的通透性，為藥物入腦發(fā)揮療效提供了可能。

目前已有通過(guò)物理或化學(xué)方法短暫性開(kāi)放血-腦脊液屏障來(lái)增加藥物入腦可能性，但該方法是侵入性和非靶向性的，并且會(huì)增加大量潛在的神經(jīng)毒素和其他化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入腦內(nèi)的風(fēng)險(xiǎn)，不利于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)且使產(chǎn)生不良副作用的可能性增大。相比之下，納米載體，例如脂質(zhì)體和納米粒，具有很好的靶向選擇性。已經(jīng)有越來(lái)越多可選擇的納米粒和脂質(zhì)體種類(lèi)用于治療。經(jīng)表面修飾后的脂質(zhì)體或納米粒，可以通過(guò)特定的機(jī)制靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)。篩選可以跨越血-腦脊液屏障的肽，提高藥物精確的選擇性，以達(dá)到更好的治療效果，降低藥物所導(dǎo)致的全身毒性。