[發(fā)明專利]一種定量檢測人體血清淀粉樣蛋白A的試劑盒及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110196269.1 | 申請日： | 2021-02-22 |
| 公開（公告）號： | CN113219181B | 公開（公告）日： | 2022-09-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李云;劉霖;裴華;李元麗;李伯宏;陶靜;劉雨薇 | 申請（專利權(quán)）人： | 中元匯吉生物技術(shù)股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 400037 重慶市大渡口區(qū)*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 定量 檢測 人體 血清 淀粉 蛋白 試劑盒 及其 制備 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種定量檢測人體血清淀粉樣蛋白A的試劑盒，所述試劑盒包括試劑R1以及試劑R2，其中試劑R1包括緩沖液50?200mM，表面活性劑I 0.1?0.5％，表面活性劑II 0.1?0.5％，防腐劑0.1?0.5％，無機(jī)鹽0.1?0.8％以及促凝劑1?2％；試劑R2包括緩沖液50?100mM，蛋白保護(hù)劑1?5％，防腐劑0.1?0.5％，無機(jī)鹽0.1?0.8％以及包被有SAA單克隆抗體的膠乳顆粒。本發(fā)明通過在膠乳微球的標(biāo)記過程中添加苯甲酸以及嗎啉組合物，增加了膠乳微球與抗體的標(biāo)記效率，顯著提升試劑在檢測高值陽性樣本時的抗HOOK能力，使試劑的線性范圍達(dá)到2?500mg/L。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域，具體涉及一種定量檢測人體血清淀粉樣蛋白A的試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)
血清淀粉樣蛋白A(serum amyloid A protein，SAA)是一種由肝細(xì)胞產(chǎn)生后被分泌到血清中的一種急性時相反應(yīng)蛋白，屬于載脂蛋白家族中的異質(zhì)類蛋白質(zhì)，與血漿高密度脂蛋白(HDL)結(jié)合。炎癥或感染急性期患者體內(nèi)SAA含量在48-72小時內(nèi)急速升高，并且在疾病的恢復(fù)期迅速下降，作為新的炎癥或感染急性期檢測指標(biāo)，SAA在臨床應(yīng)用中發(fā)揮著重要作用。
正常人體中，SAA的含量在10mg/L以下，在發(fā)生輕微感染時，人體內(nèi)SAA的含量上升并處于10-200mg/L范圍內(nèi)。但是對于部分疾病患者而言，其體內(nèi)SAA含量將顯著上升，例如重癥的手足口患兒體內(nèi)SAA含量高達(dá)600mg/L，患者體內(nèi)超高的SAA含量能夠有效的反應(yīng)疾病的嚴(yán)重性，同時更加有利于醫(yī)生進(jìn)行疾病的判別。
目前，SAA的檢測方法包括酶聯(lián)免疫法以及膠乳增強(qiáng)免疫比濁法等，酶聯(lián)免疫由于其過程繁瑣，檢測耗時長，不利于高通量的檢測。膠乳增強(qiáng)免疫比濁法具有檢測速度快，準(zhǔn)確度高的優(yōu)點，在做到高通量檢測的同時保證了檢測的準(zhǔn)確性，已逐步發(fā)展為重要的臨床檢測手段，但是目前市面上的SAA膠乳增強(qiáng)免疫比濁法檢測試劑盒具有檢測線性窄(多數(shù)試劑線性范圍為200mg/L以下)、抗HOOK能力弱等缺點，不利于疾病的診斷以及不同醫(yī)學(xué)水平的判定。
發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)上述需求，發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，通過在SAA檢測試劑盒的膠乳微球標(biāo)記過程中添加苯甲酸以及嗎啉組合物，可以顯著增加SAA抗體與膠乳微球的標(biāo)記效率，同時通過調(diào)整試劑配置，顯著提升了試劑的檢測線性范圍以及抗HOOK能力。
本發(fā)明提供一種定量檢測人體血清淀粉樣蛋白A(SAA)的試劑盒，采用如下技術(shù)手段：一種定量檢測人體血清淀粉樣蛋白A的試劑盒，其特征在于，包括試劑R1以及試劑R2；
所述試劑R1包括的成分及相應(yīng)的含量為：緩沖液50-200mM，表面活性劑I 0.1-0.5％，表面活性劑II 0.1-0.5％，防腐劑0.1-0.5％，無機(jī)鹽0.1-0.8％以及促凝劑1-2％；
所述試劑R2包括的成分及相應(yīng)的含量為：緩沖液50-100mM，蛋白保護(hù)劑1-5％，防腐劑0.1-0.5％，無機(jī)鹽0.1-0.8％以及包被有SAA單克隆抗體的膠乳顆粒；
所述包被有SAA單克隆抗體的膠乳顆粒的制備過程包括：在組分A以及組分B的存在下，SAA單克隆抗體與膠乳顆粒偶聯(lián)，所述組分A選自嗎啉或哌啶中的至少一種，優(yōu)選為嗎啉，所述組分B選自苯甲酸或水楊酸中的至少一種，優(yōu)選為苯甲酸。
優(yōu)選地，在所述試劑R1中：
所述緩沖液選自Tris、MOPS或磷酸鹽緩沖液中的至少一種，優(yōu)選為MOPS緩沖液；所述表面活性劑I選自Triton X-100或Tween-20中的至少一種，優(yōu)選為Tween-20；所述表面活性劑II選自Brij 58、Tween-80或A90中的至少一種，優(yōu)選為A90；所述防腐劑選自Proclin-300、疊氮鈉或慶大霉素中的至少一種；所述無機(jī)鹽選自氯化鈉或氯化鉀中的至少一種；所述促凝劑選自PEG6000或PEG8000中的至少一種。
優(yōu)選地，所述試劑R1的pH為6-8，優(yōu)選為6-6.5。
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