[發(fā)明專利]一種外泌體的紙基檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110178310.2
• 申請(qǐng)日: 2021-02-08
• 公開（公告）號(hào): CN112608983A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許文濤;黃昆侖;王馨嫻;李舒婷;程楠;朱龍佼;杜再慧;張博洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6851
• 分類號(hào): C12Q1/6851
• 代理公司: 北京領(lǐng)科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 張丹

本發(fā)明提供一種外泌體的紙基檢測(cè)方法，包括：（1）識(shí)別與分子轉(zhuǎn)換體系，（2）擴(kuò)增反應(yīng)體系，（3）LFB檢測(cè)分析體系。本發(fā)明將外泌體轉(zhuǎn)換為單鏈DNA靶標(biāo)，通過核酸擴(kuò)增技術(shù)對(duì)單鏈DNA進(jìn)行擴(kuò)增，進(jìn)一步利用以PtAu?NiO₂納米酶為信號(hào)探針的側(cè)流層析試紙對(duì)擴(kuò)增出的單鏈DNA進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明以核酸側(cè)流層析試紙為終端檢測(cè)平臺(tái)，解決了外泌體無法同時(shí)定性定量檢測(cè)的難題，實(shí)現(xiàn)了對(duì)外泌體的簡(jiǎn)便、低成本檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種外泌體的紙基檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

外泌體納米級(jí)的粒徑以及在體液中超痕量級(jí)的濃度，為其鑒定分析帶來巨大挑戰(zhàn)。現(xiàn)有的分析方法不僅依賴于大型、昂貴的儀器，還需要復(fù)雜的前處理過程及專業(yè)的操作人員，另外傳統(tǒng)型外泌體檢測(cè)方法無法同時(shí)定性又定量。因此，開發(fā)快速、簡(jiǎn)便、低成本，并且高靈敏的外泌體檢測(cè)方法是以外泌體為生物標(biāo)志物的臨床疾病診療方法迅速發(fā)展和普及的關(guān)鍵。

側(cè)流層析試紙（LFB），是一種靈敏、低廉、簡(jiǎn)便的可視化快速檢測(cè)方法。早期的LFB是基于免疫識(shí)別技術(shù)，后有研究者將功能核酸與LFB相結(jié)合，發(fā)明了核酸側(cè)流層析生物傳感器，大大拓展了LFB的應(yīng)用范圍。目前，核酸LFB的應(yīng)用既包括各類核酸，也包括非核酸物質(zhì)，如微生物、蛋白質(zhì)、小分子、金屬離子等。核酸適配體相比抗體，具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、易制備、易修飾及易結(jié)合核酸擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行信號(hào)放大等的優(yōu)勢(shì)，但目前尚無將核酸LFB用于外泌體檢測(cè)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種外泌體的紙基檢測(cè)方法。

本發(fā)明的另一目的是提供基于生物傳感器技術(shù)檢測(cè)外泌體的方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，發(fā)明人設(shè)計(jì)了磁性適配體三核酸納米探針（MB-ATDP）進(jìn)行外泌體的識(shí)別與分子轉(zhuǎn)換，根據(jù)轉(zhuǎn)換的單鏈DNA靶標(biāo)設(shè)計(jì)模板進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用以PtAu-NiO₂納米酶為信號(hào)探針的功能核酸側(cè)流層析試紙進(jìn)行分析，構(gòu)建了一種新型的基于功能核酸側(cè)流層析試紙的外泌體可視化生物傳感器。

第一方面，本發(fā)明提供一種外泌體的紙基檢測(cè)方法，包括：（1）識(shí)別與分子轉(zhuǎn)換體系，（2）擴(kuò)增反應(yīng)體系，（3）LFB檢測(cè)分析體系。

所述檢測(cè)體系用于對(duì)待測(cè)樣品依次經(jīng)由所述識(shí)別與分子轉(zhuǎn)換體系、擴(kuò)增反應(yīng)體系進(jìn)行反應(yīng)后所得產(chǎn)物進(jìn)行側(cè)流層析分析；

其中，所述LFB檢測(cè)分析體系包括：功能核酸檢測(cè)試紙、PtAu-NiO₂納米酶信號(hào)探針、LFB體系緩沖液、TMB顯色液。

其中，所述PtAu-NiO₂納米酶信號(hào)探針為表面修飾了單鏈核酸序列A的PtAu-NiO₂納米顆粒；所述功能核酸檢測(cè)試紙的檢測(cè)線處修飾了單鏈核酸序列B，質(zhì)控線處修飾了單鏈核酸序列C；單鏈核酸序列A與單鏈核酸序列C部分或全部互補(bǔ)配對(duì)。

所述A、B、C只用于區(qū)別不同的序列，不用于排序。

所述互補(bǔ)包括現(xiàn)有技術(shù)或公知常識(shí)所定義的互補(bǔ)或反向互補(bǔ)，和/或根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)或公知常識(shí)所定義的互補(bǔ)原則進(jìn)行互補(bǔ)或反向互補(bǔ)。

所述檢測(cè)試紙包括現(xiàn)有技術(shù)或公知常識(shí)所制備的試紙；所述制備包括現(xiàn)有技術(shù)或公知常識(shí)所記載的制備方法。