[發明專利]一種用于快速檢測結核分枝桿菌藥敏性的試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202110178116.4
• 申請日: 2021-02-09
• 公開（公告）號: CN112941140B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 徐健;付曉婷;朱鵬飛;代婭婕;張麗麗;籍月彤;李洵融;毛昱力
• 申請（專利權）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;G01N21/65;C12R1/32
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種檢測結核分枝桿菌藥敏性的方法，包括如下步驟：（1）將待測樣本分離得到的結核分枝桿菌分別用含有孵育液R或孵育液I和孵育液O的孵育體系進行孵育；

（2）經步驟（1）孵育取樣，并進行拉曼光譜檢測，計算ΔC-D ratio；所述孵育取樣的時間為24h；

ΔC-D ratio是指經含所述孵育液R或所述孵育液I的孵育體系進行孵育的C-D ratio減去所述孵育液O的孵育體系進行孵育的C-D ratio；

所述C-D ratio是指C-D峰面積/（C-D峰面積+C-H峰面積），C-D峰和C-H峰分別位于2050-2300 cm^?1和2800-3050 cm^?1；

當所述待測樣本分離得到的結核分枝桿菌的ΔC-D ratio值大于ΔC-D ratio臨界值，所述ΔC-D ratio臨界值為-0.02，即所述待測樣本分離得到的結核分枝桿菌為耐藥菌株；當所述待測樣本分離得到的結核分枝桿菌的ΔC-D ratio值小于等于所述ΔC-D ratio臨界值，所述待測樣本分離得到的結核分枝桿菌為不耐藥菌株，實現待測樣本分離得到的結核分枝桿菌藥敏性檢測；

所述方法為非疾病的診斷方法；

所述孵育液R包括含利福平、重水和結核分枝桿菌培養基；所述孵育液R中利福平的含量為16 mg/L，重水的含量為50%，其余為結核分枝桿菌培養基；

所述孵育液I包括含異煙肼、重水和結核分枝桿菌培養基；所述孵育液I中異煙肼的含量為4 mg/L，重水的含量為50%，其余為結核分枝桿菌培養基；

所述孵育液O包括重水和結核分枝桿菌培養基；所述孵育液O中重水的含量為50%，其余為結核分枝桿菌培養基；

其中，所述結核分枝桿菌培養基為OADC添加劑和7H9培養基；所述結核分枝桿菌培養基中OADC添加劑含量為10%，其余為7H9培養基；

上述百分含量均以體積比計，且所述孵育液R、所述孵育液I和所述孵育液O中重水的含量相同。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述拉曼光譜檢測的參數如下：針孔直徑為125 μm，光柵為300 g/mm，曝光時間為5s，激光波長為532 nm，光譜為400~3500cm^-1；和/或

所述的方法中，拉曼光譜檢測前，包括對所述取樣得到的樣品進行處理的步驟；

所述處理的過程為如下1）或2）：

1）將所述樣品用ddH₂O反復清洗3次，并用ddH₂O重懸，將重懸液轉移到檢測基片上進行拉曼光譜檢測；

2）將所述樣品轉移至凍存液中放-80℃保存，在所述拉曼光譜檢測前用ddH₂O反復清洗3次，并用ddH₂O重懸，將重懸液轉移到檢測基片上進行拉曼光譜檢測。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述檢測基片選自疏水石英襯底、CaF₂襯底和鍍鋁膜載玻片中的至少一種；

所述凍存液為含甘油、7H9培養基和OADC添加劑的混合液；所述凍存液中所述甘油的體積含量為45%，所述7H9培養基的體積含量為45%和OADC添加劑的體積含量為10%。