[發明專利]一種構建瘦肉率高、生長快的優質豬核移植供體細胞的基因編輯系統及其應用

有效

• 申請號: 202110175618.1
• 申請日: 2021-02-09
• 公開（公告）號: CN112813101B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 牛冬;汪滔;馬翔;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英;陶裴裴;黃彩云
• 申請（專利權）人: 南京啟真基因工程有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

1.一種用于豬MSTN、SST基因編輯的CRISPR/Cas9系統，其特征在于，包含Cas9表達載體、針對豬MSTN基因的gRNA表達載體以及針對豬SST基因的gRNA表達載體；所述的Cas9表達載體為質粒全序列如SEQ ID NO.2所示的pU6gRNA-eEF1a-mNLS-hSpCas9-EGFP-PURO載體；所述的針對豬MSTN基因的gRNA表達載體表達 SEQ ID NO.32 所示的 gRNA，其靶點如 SEQID NO.20 所示,該表達載體由SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示的單鏈DNA退火而成的雙鏈插入載體骨架pKG-U6gRNA所得；所述的針對豬SST基因的gRNA表達載體表達 SEQ IDNO.51 所示的 gRNA，其靶點如 SEQ ID NO.39 所示，該表達載體由SEQ ID NO.43和SEQ IDNO.44所示的單鏈DNA退火而成的雙鏈插入載體骨架pKG-U6gRNA所得；所述的載體骨架pKG-U6gRNA，其質粒全序列如SEQ ID NO.3所示。

2.權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統在構建MSTN和SST基因敲除的豬重組細胞中的應用。

3.一種敲除MSTN和SST基因的豬重組細胞，其特征在于由權利要求1所述的CRISPR/Cas9系統共轉染豬原代成纖維細胞經驗證后所得。

4.權利要求3所述的重組細胞在構建MSTN和SST雙基因敲除的克隆豬中的應用。